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鹽酸多沙普侖別名:分子式:C24H33ClN2O3FBXL12蛋白抗體Depofemin中文名:環(huán)戊丙酸雌二醇別名:分子式:C26H36O3FBXL3蛋白抗體Quinestrol中文名:炔雌醇環(huán)戊醚
產(chǎn)品分類(lèi)
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1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時(shí)間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動(dòng)力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 豬鏈球菌基因分型PCR檢測試劑盒價(jià)格 |
規格 | 50T |
貨號 | LZP7905 |
實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
枸櫞酸奧芬那君;枸酸芬那君4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb (PE Conjuga)輪環(huán)藤寧
β-半糖苷酶Notch1 (5B5) Rat mAb12-冠-4
脫落酸(標準品)TDP43 (G400) Antibody甲基硫代磺酸甲酯
脫落酸(高純)p70 S6 Kinase MCF7 Control Cell Extracts1,2,3,四氫-2-萘
脫落酸,S-誘抗素; 壯芽靈TDP43 (A260) Antibody3,5-二羥基甲
胃蛋白酶(1:3000)PSD95 (D27E11) XP® Rabbit mAb三銀
核糖核酸酶A(sigma)PSD95 (D27E11) XP® Rabbit mAb溴吡啶甲酸甲酯
S-4MLANA/MART-1 Antibody5-溴煙酸甲酯
胃蛋白酶(1:12000)Phospho-μ-Opioid Receptor (Ser375) Antibody伯吉斯試劑
蛋白酶K(進(jìn)分)Rabbit IgG Isotype Control (Alexa Fluor® 647 Conjuga)哌啶甲酸甲酯
蛋白酶K(Sigma)Phospho-Doublecortin (Ser334) Antibody3,5-二溴-羥基甲
胰凝蛋白酶抑制劑CMTM6 Antibody2-溴-5-羥基甲
亮抑蛋白酶肽(進(jìn)口)Phospho-DRP1 (Ser616) Antibody異煙酸甲酯
胃酶抑素A;抑肽素;胃蛋白酶抑制劑MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb二硫代酸二酯
巖藻糖;L-巖藻糖MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb1-氨基酮鹽酸鹽
果膠酶JMJD3 Antibody7-溴庚酸酯
β-淀粉酶(70萬(wàn)u/ml液體)HDAC1 (D5C6U) XP® Rabbit mAb7-氨基庚酸酯鹽酸鹽
β-淀粉酶(酶活5萬(wàn)粉末)HDAC1 (D5C6U) XP® Rabbit mAb(1S,2S)-1,2-二基二
環(huán)加氧酶1(COX-1)ELISA試劑盒RNF126 環(huán)指蛋白126500 ul
花生四酸5脂氧合酶(Alox5)ELISA試劑盒RNF148 環(huán)指蛋白148100 ul
花生四酸12-脂氧合酶,白細胞型(Alox12l/Alox12/Alox15)ELISA試劑盒ROCK1 Rho相關(guān)蛋白激酶120 ul
花生四酸(AA)ELISA試劑盒ROCK2 Rho相關(guān)蛋白激酶2100 ul
紅細胞生成素受體(EPOR)ELISA試劑盒RPLP0 酸性核糖體蛋白大亞基P0100 ul
紅細胞生成素(EPO)ELISA試劑盒ROS/c ros 活性氧簇ROS100 ul
橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α (sm Actinin-α )ELISA試劑盒RPS6 S6核糖體蛋白100 ul
黑色素細胞(MC Ab)ELISA試劑盒Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser235/236) 酸化S6核糖體蛋白100 ul
核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)ELISA試劑盒Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser240/244) 酸化S6核糖體蛋白20 ul
豬鏈球菌基因分型PCR檢測試劑盒價(jià)格F-box蛋白相關(guān)蛋白11抗體Sertaconazole中文名:舍他康唑別名:分子式:C20H15Cl3N2OS
FBXL5蛋白抗體Doxapram hydrochloride mohydrate中文名:鹽酸多沙普侖別名:分子式:C24H33ClN2O3
FBXL12蛋白抗體Depofemin中文名:環(huán)戊丙酸雌二醇別名:分子式:C26H36O3
FBXL3蛋白抗體Quinestrol中文名:炔雌醇環(huán)戊醚別名:分子式:C25H32O2
F-box蛋白相關(guān)蛋白33抗體Tetracaine中文名:丁卡因別名:分子式:C15H24N2O2