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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
DNA酶,脫氧核糖核酸酶ⅠPhospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2,5-二氟甲酸

高峰淀粉酶來(lái)源于米曲霉(4000U/g)1BB/CD137/TNFRSF9 (D2Z4Y) Rabbit mAb基*氧基硅烷

高峰淀粉酶來(lái)源于米曲霉(100U/mg )Phospho-FLT3 (Tyr591) Antibody2,2'-偶氮二異丁基脒

甘油-酸脫氫酶FLT3 (8F2) Rabbit mAb

菠蘿蛋白酶Phospho-FLT3 (Tyr969) (C24D9) Rabbit mAb2-氟磺酰

DL-對氨酸Clusrin (D7N2K) XP® Rabbit mAb辛酸亞錫

延胡素酸氨基酯Clusrin (D7N2K) XP® Rabbit mAb肼(無(wú)水)

輔羧酶;羧化輔酶;焦酸硫素Ajuba (D4D8P) Rabbit mAb鹽酸丁脒

吲哚酸酯Phospho-FLT3 (Tyr589/591) (30D4) Rabbit mAb硫酸鹽

α-環(huán)糊精Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)哌-2-羧酸

氧化酶(XOD)Phospho-FLT3 (Tyr591) (54H1) Mouse mAb3,二甲酰

?；?/font>,L-氨基?；窹erilipin-1 (K117) Antibody2-氨基-N-(2--6-基)噻唑-5-甲酰

胰蛋白酶1:250eIF4G2/p97 (D1A10) Rabbit mAb2-氨基-5-溴噻唑

胰蛋白酶1:2500TrK (pan) (A7H6R) Rabbit mAb (Biotinylad)硝基咪唑

阿利多eIF4H (D85F2) XP® Rabbit mAb1-甲基-硝基咪唑

核糖核酸酶A(美侖)；RNase A;核糖核酸酶IeIF4H (D85F2) XP® Rabbit mAb5-溴噻唑

5‘-酸吡哆，一水Perilipin-1 (D418) Antibody2-咪唑

NADPH;還原輔酶Ⅱ四鈉鹽;(羅氏)Phospho-FGF Receptor (Tyr653/654) Antibody2-(三氟甲基)基

核因子κB(NF-κB)ELISA試劑盒Rb/P105 RB  成視網(wǎng)膜細胞瘤抑癌蛋白100 ul

和肽素(copeptin)ELISA試劑盒phospho-Rb/p105-Rb(Ser780)  酸化成視網(wǎng)膜細胞瘤抑癌蛋白20 ul

含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(cháng)因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA試劑盒RRAD  RRAD100 ul

含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(cháng)因子樣域酪氨酸激酶1(Tie-1)ELISA試劑盒Rsk2/MAPKAP Kinase 1b  核糖體S6激酶RSK2100 ul

過(guò)氧化脂質(zhì)/過(guò)氧化物酶(LPO)ELISA試劑盒Phospho-RSK2 (Ser227)  酸化核糖體S6激酶RSK220 ul

過(guò)氧化物酶體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)ELISA試劑盒Phospho-RSK2 (Tyr529)  酸化核糖體S6激酶RSK2100 ul

過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體β(PPAR-B/PPARD)ELISA試劑盒RSK3/Ribosomal S6 kinase 3  核糖體蛋白S6激酶家族RSK320 ul

過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒Phospho-RSK3 (Thr353/356)   酸化核糖體蛋白S6激酶家族RSK3500 ul

過(guò)氧化氫酶(CAT)ELISA試劑盒Phospho-RSK3 (Thr356/Ser360)   酸化核糖體蛋白S6激酶家族RSK3100 ul
豬流感病毒PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家組蛋白脫乙?；?/font>6（HDAC6）活性比色法定量elisa試劑盒    20次    *

組蛋白脫乙?；?/font>5（HDAC5）活性比色法定量elisa試劑盒    20次    *

組蛋白脫乙?；?/font>4（HDAC4）活性比色法定量elisa試劑盒    20次    *

組蛋白脫乙?；?/font>3（HDAC3）活性比色法定量elisa試劑盒    20次    *

組蛋白脫乙?；?/font>2（HDAC2）活性比色法定量elisa試劑盒    20次    *

組蛋白脫乙?；?/font>11（HDAC11）活性比色法定量elisa試劑盒    20次    *

組蛋白脫乙?；?/font>10（HDAC10）活性比色法定量elisa試劑盒    20次    *

組蛋白脫乙?；?/font>1（HDAC1）活性比色法定量elisa試劑盒    20次    *