注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
羥基纖維素（4000mpas）RECK (D8C7) Rabbit mAb2-氟磺酰

麥芽糖;淀粉糖Hydroxy-HIF-1α (Pro564) (D43B5) XP® Rabbit mAb2-磺酰

ONX-0914 (PR-957)Hydroxy-HIF-1α (Pro564) (D43B5) XP® Rabbit mAb炔聯(lián)

N-壬?；?N-甲基葡萄糖(MEGA9)Flotillin-2 (C42A3) Rabbit mAb間異酸酯

甲基纖維素(100000mPa.s)AMPA Receptor 3 (GluA 3) Antibody2-(*硅基)

甲基纖維素(4000 mPa.s)Phospho-PDK1 (Ser241) (C49H2) Rabbit mAb三鈉

對基-β-D-吡喃半糖苷(PNPG)Phospho-PDK1 (Ser241) (C49H2) Rabbit mAb2 , 二溴-5-甲基吡

D-核糖(標準品)Notch1 (C37C7) Rabbit mAb三氟磺酸銀

D-核糖Chk2 (1C12) Mouse mAb三氟肼鹽酸鹽

二硫蘇糖(DTT)Chk2 (1C12) Mouse mAb5-溴-2-氟

D(+)-松二糖Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb (PE-Cy®7 Conjuga)氟肼鹽酸

D-果糖-1,6-二酸三鈉鹽GOT1 (E4A4O) Rabbit mAb2-氟-甲基-5-溴吡啶

海帶多糖；昆布糖 (來(lái)自褐藻類(lèi))S100A9 (D5O6O) Rabbit mAb (IHC Formulad)L-甘氨酸

胰酶(1:250)，胰酶粉Phospho-HDAC4 (Ser246)/HDAC5 (Ser259)/HDAC7 (Ser155) (D27B5) Rabbit mAb巰基酸甲酯

木瓜蛋白酶(800u/mg)Phospho-HDAC4 (Ser246)/HDAC5 (Ser259)/HDAC7 (Ser155) (D27B5) Rabbit mAb2-氨基-5-甲酸

木瓜蛋白酶(2000u/mg)HA-Tag (6E2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-煙酸

胰酶(1:2500)GST (26H1) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2,二甲

胰酶(1:4500)Notch3 (8G5) Rat mAb2-巰基-5-甲基-1,3,噻二唑

活化素A(ACV-A)ELISA試劑盒RGS2  G蛋白信號轉導調節因子2100 ul

活化凝血因子X(FXa)ELISA試劑盒RGS5  G蛋白信號轉導調節因子520 ul

活化蛋白C(APC)ELISA試劑盒RhoA  RhoA100 ul

磺基轉移酶(SULT1A1)ELISA試劑盒Rho C  RhoC20 ul

黃體生成素(LH)ELISA試劑盒RIP2  受體結合絲氨酸蘇氨酸激酶2100 ul

氧化酶(XOD)ELISA試劑盒Phospho-RIP2 (Ser176)  酸化受體結合絲氨酸蘇氨酸激酶2100 ul

環(huán)酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒RIP3  受體結合絲氨酸蘇氨酸激酶3100 ul

環(huán)酸鳥(niǎo)苷(cGMP)ELISA試劑盒RICTOR  雷帕霉素靶蛋白復合體2100 ul

環(huán)加氧酶2(COX-2)ELISA試劑盒Phospho-Rictor (Thr1135)  酸化雷帕霉素靶蛋白復合體2100 ul
豬鏈球菌PCR檢測試劑盒規格流感病毒H3N2血凝素抗體Diosbulbin C中文名：別名：分子式：C19H22O7

艾滋病病毒抗體Jatrophane 6中文名：別名：分子式：C37H48O14

瘤病毒16型L2抗體Coronarin D中文名：別名：15-Hydroxy-8(17),12-labdadien-16,15-olide分子式：C20H30O3

HOMER2抗體Jatrophane 1中文名：別名：分子式：C36H4513

解旋酶樣轉錄因子抗體5,8,9,14-Tetraacetoxy-3-benzoyloxy-10,15-dihydroxypepluane中文名：別名：分子式：C35H46O12
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。