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羊流產(chǎn)沙門(mén)氏菌PCR檢測試劑盒規格上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:iso-Hyd檢測試劑盒 在ELISA中應用的抗原要求有較高的特異性、親和力和純度。
產(chǎn)品分類(lèi)
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 羊流產(chǎn)沙門(mén)氏菌PCR檢測試劑盒規格 |
英文名稱(chēng) | Salmonella abortus ovisPCR |
貨號 | LZP7248 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
Pyridaben分散黃39 分析標準品正辛酸 AR,99%
ImidaclopridN,N-二甲基對苯二胺 98%正辛酸 ≥98%, FG
TMTDN,N-二甲基對苯二胺 90%正 AR,97%
ESBO2-溴乙胺鹽 98%化 AR,≥99.0%
Ruscogenin2-二乙氨基氯乙烷鹽酸鹽 99%化 GR,≥99.5%(AT)
Sarsasapogenin5-氯楊酸 99%化 ≥99.99% metals basis
Schleicheol 1氯化膽堿 AR,98%化 CP,98.0%
Schleicheol 2氯化膽堿 99%化 ACS, ≥99.0%
Tigogenin二月桂酸二丁基錫 95%化 ≥99.999% metals basis
Sitoindoside I2-二甲氨基氯乙烷鹽酸鹽 99%化溶液 100g/L
Sitostene二酸二乙酯 99%化鈉 AR,99.5%
Beta-Sitosterol二乙氨基乙 99%化鈉 99.99% metals basis
Sitosteryl palmitate2,3-二溴丁二酸 98%三氟磺酸 98%
Stellasterol二乙烯三胺五乙酸 CP三氟磺酸 99%
Stigmast-4-ene-3,6-diol二乙烯三胺五乙酸 AR,99.0%三酐 98%
Stigmast-4-ene-3,6-dione鹽酸二 99%聚四氟磁力攪拌子 A-507
異煙酸Sec24D (D9M7L) Rabbit mAbPhospho-SRF (Ser103) 磷酸化生長(cháng)激素釋放因子抗體(血清應答因子)
L-蘋(píng)果酸FRMD6 (D8X3R) Rabbit mAbPhospho-SRC-3 (Thr24) 磷酸化類(lèi)固受體輔助活化因子-3
蛋白酶K溶液(20 mg/ml)MLL1 (D2M7U) Rabbit mAb (Ami-terminal Antigen)phospho-Src(Tyr529) 磷酸化Src原癌基因抗體
多聚賴(lài)氨酸0.1%溶液PTPN22 (D6D1H) Rabbit mAbphospho-Src(Tyr418) 磷酸化Src原癌基因抗體
鹽酸四環(huán)素溶液,50 mg/mlVCAM-1 Antibody (Rodent Specific)phospho-Src(Tyr215) 磷酸化Src原癌基因抗體
8-羥基喹啉硫酸鹽(植物細胞培養級)Delta FosB (D3S8R) Rabbit mAbphosphos-PCNA (Tyr211) 磷酸化增殖細胞核抗原抗體
D-葡糖糖-6-磷酸二鈉二CBX8 (D2O8C) Rabbit mAbphospho-SOX9(Ser181) 磷酸化轉錄因子SOX9蛋白抗體
亞硫酸氫鈉(AR)Cas9 (7A9-3A3) Mouse mAbphospho-SNAI2(Ser155+Ser158+Ser160+Tyr164+Tyr169) 磷酸化鋅指轉錄因子Slug抗體
丁二酸鈉(AR)Cas9 (7A9-3A3) Mouse mAbPhospho-SMC1(Ser957) 磷酸化染色體結構維持蛋白質(zhì)1抗體
氯化銅二(AR)Ret (D3D8R) Rabbit mAbPhospho-SMC1 (Ser360) 磷酸化染色體結構維持蛋白質(zhì)1抗體
羊流產(chǎn)沙門(mén)氏菌PCR檢測試劑盒規格兔子瘦素(LEP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃100毫升
兔子髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
兔子透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃25毫升
兔子脫氧吡啶/脫氧吡啶啉(DPD)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1米
兔子細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT10克
兔子細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
兔子細胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1米
兔子纖溶酶原(Plg)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。