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馬流產(chǎn)沙門(mén)氏菌PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:PS-2檢測試劑盒 主要有三類(lèi),即自然抗原、人工合成抗原和基因重組抗原
產(chǎn)品分類(lèi)
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時(shí)間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動(dòng)力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 馬流產(chǎn)沙門(mén)氏菌PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū) |
英文名稱(chēng) | Salmonella abortus equiPCR |
貨號 | LZP7247 |
實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
Hirudin recombinant無(wú)氯化鈣 AR,96.0%正己烷 AR,97%
rhIL-1ra無(wú)氯化鈣 CP,96.0%正己烷 for GC, ≥99.0% (GC)
rhG-CSF無(wú)氯化鈣 ACS正己烷 >99%(GC)
Iodoacetic acid無(wú)氯化鈣 99.99% metals basis正己烷 農殘級, ≥98.0% (GC)
Bis(2-ethylhexyl) Azelate檸檬酸,一 99.995% metals basis正己烷 光譜純, ≥98.0% (GC)
DPRP尼泊金乙酯 AR,99%正己烷 分析標準品,>99.5%(GC)
DIBP硫酸亞鐵,七 AR正己烷 ACS,>98.5%(GC)
DNHP硫酸亞鐵,七 99.99% metals basis異 AR, ≥99.5%
Diphenyl phthalate硫酸亞鐵,七 ACS, ≥99.0%異 ACS 光譜級, ≥99.5%
Shanzhisize methyl ester硫酸亞鐵,七 for plant cell culture, ≥99% AR,98.0%()
Triethyl phosphite檸檬酸 CP,99.0% CP,99.5%
Gly-Pro-AMC鈉石灰 醫用級,紅色 99.995% tmetals basis
3,5-Dimethylphel鈉石灰(帶指示劑) ACS乙酰乙酸甲酯 99%
3′-Nitroacetophene鈉石灰 CP正辛酸 standard for GC, ≥99.5% (GC)
3-Amibenzeneboronic acid乙酸鈉,三 CP,98%正辛酸 CP,98%
4-Vinylphenylboronic acid酸銨 AR,97%正辛酸 分析標準品,≥99.9%(GC)
司班80;司盤(pán)80STAM2 Antibodyphospho-STAT5a(Tyr694) 磷酸化信號轉導和轉錄激活因子5a抗體
聚乙二1000Sec24C (D9M4N) Rabbit mAbphospho-STAT5a(Ser780) 磷酸化信號轉導和轉錄激活因子5a抗體
胰蛋白胨(BD)Phospho-ALK (Tyr1507) (D6F1V) Rabbit mAbphospho-STAT5a(Ser726) 磷酸化信號轉導和轉錄激活因子5a抗體
丹磺酰氯Mo-Methyl Lysine [mme-K] MultiMab™ Rabbit mAb mixPhospho-Stat4 (Tyr693) 磷酸化信號轉導和轉錄激活因子4抗體
N-乙基順二酰亞胺Tri-Methyl Lysine Motif [tme-K] (D1L1X) Rabbit mAbphospho-STAT3 (Tyr705) 磷酸化信號轉導和轉錄激活因子3抗體
碳酸氫(AR)Dinitrophel (D1D6) Rabbit mAbphospho-STAT3 (Ser727) 磷酸化信號轉導和轉錄激活因子3抗體
十二烷基磺酸鈉(BR)Digoxigenin (D8Q9J) Rabbit mAbPhospho-Stat2 (Tyr690) 磷酸化信號轉導和轉錄激活因子2抗體
茶堿Na Channel β1 Subunit (D9T5B) Rabbit mAbphospho-STAT1 (Tyr701) 磷酸化信號轉導與轉錄激活因子1抗體
纖維素酶MRP1/ABCC1 (D7O8N) Rabbit mAbphospho-STAT1 (Ser727) 磷酸化信號轉導與轉錄激活因子1抗體
硫酸軟骨素Na Channel β2 Subunit (D1S8E) Rabbit mAbPhospho-SRF (Ser77) 磷酸化生長(cháng)激素釋放因子抗體(血清應答因子)
馬流產(chǎn)沙門(mén)氏菌PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)兔子神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT1把/包
兔子神經(jīng)生長(cháng)因子(NGF)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT1個(gè)
兔子神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:500克
兔子神經(jīng)營(yíng)養因子3(NT-3)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
兔子神經(jīng)營(yíng)養因子4(NT-4)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT1個(gè)
兔子腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100毫升
兔子生長(cháng)激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃5毫升
兔子視黃醇結合蛋白4(RBP-4)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃5克