注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
雙(2,二基)草酸酯(>98.0%(T))Phospho-Caveolin-1 (Tyr14) Antibody2-溴-3'-酮

草酸雙[2,4,5-三-6-(戊氧羰基)基]酯(>98.0%(HPLC))p53 (D2H9O) Rabbit mAb (Rodent Specific)硫代甲酰

8-氨基-1,3,6-萘三磺酸二鈉鹽水合物(>99.0%(HPLC)(T))Flotillin-1 Antibody2--甲基-5-硝基吡啶

8--1-萘磺酸(>95.0%(HPLC)(T))TTK Antibody2-氟-吡啶

ANS-NH4(8-基-1-萘磺酸銨)(>95.0%(HPLC)(T))TTK Antibody硫代卡巴肼

ANS-Na(=8-基-1-萘磺酸鈉)(>97.0%(N))Cleaved-PARP (Asp214) (E2T4K) Mouse mAb(S)-2,2-二甲基-1,二氧戊環(huán)-甲

ANS-Mg(=8-基-1-萘磺酸鎂)(>98.0%(HPLC)(T))CLK3 Antibody4,6-二甲基-2-巰基嘧啶

 102(>97.0%(HPLC)(N))DNMT3A (D2H4B) Rabbit mAb2,二酮

 314(>98.0%(HPLC)(N))VRK3 Antibody(R)-(+)-alpha,alpha-二基脯氨

化熒光素(>90.0%(HPLC))eIF3J Antibody月桂硫酸酯銨鹽

2',7'-二熒光素(>95.0%(HPLC))Human CD40 Ligand (hCD40L)甲氧基水楊酸

2,二氨基萘(>98.0%(GC)(T))Blk Antibody1-甲基-基

溴甲菲啶(>95.0%(HPLC)(N))eIF6 Antibody3,3,三氟-1-

7-(二甲基氨基)-甲基(>95.0%(GC)(T))Ero1-Lα Antibody人參皂苷 Rg1

7-(二甲基氨基)-三氟甲基(>97.0%(GC)(T))Ero1-Lα Antibody1,5-萘二

2,二基馬來(lái)酸酐(>95.0%(GC))VCAM-1 (D2T4N) Rabbit mAb (Mouse Specific)山梨酸

7-(二基氨基)-羧酸(>98.0%(GC)(T))EGF Receptor (V279) Antibody2--5-甲基嘧啶

[[(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)(3,5-二甲基-2H-吡咯-2-亞基)甲基]](二氟烷)(>98.0%(GC))ROS1 (69D6) Mouse mAb2,5-二嘧啶

顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒phospho-Akt(Thr308)  酸化蛋白激酶B100 ul

抗中性粒細胞核周(pANCA)ELISA試劑盒phospho-Akt (Thr450)  酸化蛋白激酶B500 ul

抗中性粒/中心體(ACA)ELISA試劑盒Phospho-HDAC4(Ser246)/HDAC5(Ser259)/HDAC7(Ser155)  酸化組蛋白去?；?、5、7100 ul

抗增殖細胞核抗原(PCNA)ELISA試劑盒Phospho-HDAC4(Ser632)/HDAC5(Ser498)/HDAC7(Ser486)  酸化組蛋白去?；?、5、7100 ul

抗胰蛋白酶(AT)ELISA試劑盒PKN2  蛋白激酶N220 ul

抗血小板IgA(PA-IgA)ELISA試劑盒RKIP  Raf激酶抑制蛋白100 ul

抗血小板(IgM)ELISA試劑盒PKR  蛋白激酶R20 ul

抗血小板(IgG)ELISA試劑盒Phospho-PKR (Thr446)  酸化蛋白激酶R100 ul

抗心脂IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒Phospho-PKR (Thr451)  酸化蛋白激酶R100 ul
志賀氏菌PCR檢測試劑盒規格輔酶Q10B抗體cis-Methylisoeugel中文名：順式甲基異丁香酚別名：Liquid分子式：C11H14O2

細胞因子受體樣因子1抗體p-Coumaric acid ethyl ester中文名：對香豆酸乙酯別名：Ethyl p-coumarate分子式：C11H12O3

半胱氨酸亞磺酸脫羧酶抗體erythro-Guaiacylglycerol中文名：別名：分子式：C10H14O5

神經(jīng)網(wǎng)蛋白CopineVI抗體3,4-Diacetoxycinnamamide中文名：3,4-二乙酰氧基肉桂酰胺別名：分子式：C13H135

豬瘟病毒包膜糖蛋白E2抗體Tatariid A中文名：別名：分子式：C12H16O5
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。