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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
甲(>99.8%(GC))Met (25H2) Mouse mAb3,3'-二吲哚

正辛烷(>98.5%(GC))ARP2 Antibody10-羥基喜樹(shù)

(>99.5%(GC))ARP2 Antibody-鄰甲肼鹽酸鹽

庚烷(>99.0%(GC))Phospho-Met (Tyr1234/1235) (3D7) Rabbit mAb對叔丁基芐

酸酯(>99.5%(GC))Phospho-Met (Tyr1234/1235) (3D7) Rabbit mAb2,二

酸丁酯(>99.0%(GC))c-IAP2 (58C7) Rabbit mAb2-溴

酸異戊酯(>98.0%(GC))c-IAP2 (58C7) Rabbit mAb3,5-二-1-溴

(>99.5%(GC))VASP (9A2) Rabbit mAb2-甲基-甲酸

(>99.5%(GC))VASP (9A2) Rabbit mAb2-甲基-甲酸

1-丁(>99.0%(GC))Phospho-Met (Tyr1349) (130H2) Rabbit mAbN-?；?D-亮氨酸

溴(含穩定劑二)(>99.0%(GC))Phospho-Met (Tyr1349) (130H2) Rabbit mAb2,5-二氟酮

環(huán)己烷(>99.5%(GC))Phospho-Met (Tyr1349) (130H2) Rabbit mAb2-吡啶酸

二甲亞砜(>99.0%(GC))α-Actinin Antibody2-基吡

N,N-二甲酰(>99.5%(GC))Phospho-Met (Tyr1003) (13D11) Rabbit mAb2-氟-6-

甲酸酯(>98.0%(GC))Phospho-Met (Tyr1003) (13D11) Rabbit mAb甲基 吡咯烷-甲酸甲酯 鹽酸鹽

甲酸甲酯(>98.0%(GC))CDK6 (DCS83) Mouse mAbO-6-芐基鳥(niǎo)嘌呤

庚烷(>99.0%(GC)]CDK6 (DCS83) Mouse mAb2-氟酸

己烷(>96.0%(GC)]Phospho-Ack1 (Tyr284) AntibodyN-2-酰鳥(niǎo)嘌呤

雞膽囊收縮素A受體(CCKAR)ELISA試劑盒Phospho-PERK (Thr980)  酸化蛋白激酶樣內質(zhì)網(wǎng)激酶100 ul

雞單純皰疹病毒Ⅱ型(HSVⅡ-Ab)ELISA試劑盒PFK2/PFKFB3  6酸果糖激酶2100 ul

雞催素(PRL/LTH)ELISA試劑盒Phospho-PFK2 (Ser466)  酸化6酸果糖激酶2100 ul

雞促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒Fascin1  纖維束1100 ul

雞促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒phospho-FSCN1(Ser39)  酸化纖維束蛋白同源物1100 ul

雞促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒PG-C  胃蛋白酶原C500 ul

雞雌二(E2)ELISA試劑盒PPARGC1A/PGC-1 Alpha  過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α100 ul

雞傳染性支氣管炎(IB)ELISA試劑盒PGRN  顆粒蛋白前體1 Kit

雞傳染性法氏囊病(IBD)ELISA試劑盒Prohibitin  抑制素/腫瘤抑制因子100 ul
玉米MSPCR檢測試劑盒廠(chǎng)家真核啟動(dòng)因子2α抗體(eIFα2)2-Ami-3-benzyloxypyridine中文名：2-氨基-3-芐氧基吡啶別名：分子式：C12H12N2O

磷酸化一氧化氮合成酶3（內皮型）抗體N-(4-Amibenzoyl)-β-alanine中文名：對氨基苯甲酰-β-丙氨酸別名：分子式：C10H12N2O3

抗志賀毒素大腸桿菌O139抗體（仔豬腫病志賀毒素大腸桿菌O139）2-(2-Amiethyl)-1-methylpyrrolidine中文名：2-(2-氨乙基)-N-甲基吡咯烷別名：分子式：C7H16N2

腸出血性大腸桿菌埃希氏菌O157:H7抗體5-Amifluorescein中文名：5-氨基熒光素別名：分子式：C20H135

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶ERK抗體4-Ami-2,5-dimethoxy-N-phenylbenzenesulphonamide中文名：4-氨基-2,5-二甲氧基-N-苯基苯磺酰胺別名：分子式：C14H16N2O4S