組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
石油(for GC,用于環(huán)境分析)Phospho-FoxO1 (Thr24)/FoxO3a (Thr32)/FoxO4 (Thr28) (4G6) Rabbit mAb1-(甲氧基基)哌

季戊四(色譜固定液,150℃)Phospho-FoxO1 (Thr24)/FoxO3a (Thr32)/FoxO4 (Thr28) (4G6) Rabbit mAb雙酰酮基二丁基錫

正(農殘級)Phospho-HP1γ (Ser83) Antibody阿卡波糖

異硫酸酯(99%,用于HPLC標記)Phospho-PAK1 (Thr423)/PAK2 (Thr402) Antibody溴五氟

正戊烷(農殘級)Phospho-PAK1 (Thr423)/PAK2 (Thr402) Antibody5-吡啶-2-

聚酰粉(柱層析用)PAK1 Antibody1-(2-氟基)哌

酸(色譜級, 85-90%)PAK1 Antibody戊

聚酰粉(柱層析用，200-400目)CD8α (RPA-T8) Mouse mAb (APC-Cy7® Conjuga)甲氧基-甲氧基羰基酸

聚酰粉(柱層析用，10-30目)AMPKα (23A3) Rabbit mAb4,5-二噠-3(2H)-酮

酸氫二鈉,二水(for HPLC, ≥99%(T))PAK1/2/3 Antibody2,6-二羥基酮

高酸鈉，一水(色譜級,≥99.0%(T))PAK1/2/3 Antibody間甲磺酰

無(wú)水硫酸鈉(農殘級)Phospho-PAK1 (Ser199/204)/PAK2 (Ser192/197) Antibody磺酰

無(wú)水硫酸鈉(for HPLC,≥99.0%(T))Phospho-PAK1 (Ser199/204)/PAK2 (Ser192/197) Antibody氟試劑

碳酸氫鈉(for HPLC,≥99.0%)Phospho-PAK1 (Ser144)/PAK2 (Ser141) Antibody奎諾二甲基酸酯

四丁基酸二氫銨(HPLC)Phospho-PAK1 (Ser144)/PAK2 (Ser141) Antibody氘代氫化鋰鋁

四己基硫酸氫銨(用于離子色譜,≥99.0%(T))Phospho-PAK2 (Ser20) Antibody溴甲基-5-并噻吩

三鹽酸鹽(for HPLC,≥99.0%)Phospho-PAK2 (Ser20) Antibody聯(lián)二噻吩

四甲基硫酸氫銨(99%)PAK2 Antibody五氟甲

alpha突觸核蛋白（淀粉樣前體非A4成分蛋白）低聚物(SNCA oligomer)ELISA試劑盒NAP1/NAP1L1  核小體組裝蛋白1100 ul

Alpha-D 酚/維生素E(Alpha-D TPL)ELISA試劑盒NB3/CNTN6  神經(jīng)細胞NB3特定蛋白100 ul

alpha-1腎上腺素能受體(ADRA1)IgGELISA試劑盒P95/NBS1  DNA修復蛋白NBS1100 ul

AFG3樣蛋白2(AFG3L2)ELISA試劑盒Phospho-p95/NBS1 (Ser343)  酸化DNA修復蛋白NBS1100 ul

Adropin(ENHO)ELISA試劑盒N-cadherin  N-鈣粘附分子100 ul

ADP-核糖基化因子5(ARF5)ELISA試劑盒E-cadherin  上皮鈣粘附分子100 ul

ADP-核糖基化因子4(ARF4)ELISA試劑盒Nck1/Nck2  NCK銜接因子蛋白2100 ul

ADAM金屬肽酶含血小板反應蛋白1基元4(ADAMTS4)ELISA試劑盒NCOA2/KAT13C  核受體輔助激活蛋白220 ul

8異F2α(8-iso-PGF2a)ELISA試劑盒NCoR1  核受體輔助抑制因子1100 ul
小麥PCR檢測試劑盒規格脆性組氨酸三聯(lián)體抗體Baclofen中文名：巴氯芬別名：分子式：C10H12Cl2

纖維母細胞表面蛋白抗體1-(4-(3-Chloropropoxy)-3-methoxyphenyl)ethane中文名：別名：分子式：C12H15ClO3

卵泡抑素抗體Nifuroxazide中文名：硝呋酚酰肼別名：分子式：C12H9N3O5

叉頭蛋白J1抗體Prasugrel中文名：普拉格雷別名：分子式：C20H20F3S

腦型脂肪酸結合蛋白抗體Fexofenadine hydrochloride中文名：鹽酸非索非那定別名：分子式：C32H40Cl4