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白(IgM)ELISA試劑盒Torc2/Crtc2 CREB轉錄共激活因子TORC220 ulP0蛋白(IgG)ELISA試劑盒Phospho-Torc2/Crtc2 (Ser171) 酸化CREB轉錄共激活因
產(chǎn)品分類(lèi)
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 水泡病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū) |
規格 | 50T |
貨號 | LZP7819 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
氫化鈣(98.5% metals basis(去除Mg), Mg <1%)Phospho-Chk1 (Ser345) Antibody2--氟甲酸
對硝基標準溶液(1.00mg/ml,基體:甲)Phospho-Chk1 (Ser345) Antibody2--5-氟甲酸
對硝基(分析標準品,用于環(huán)境分析)Dynamin I/II Antibody三氟甲氧基溴
環(huán)戊酮(標準品)Phospho-Chk1 (Ser317) Antibody2-溴-6-氟甲酸
代正烷(標準品)Phospho-Chk1 (Ser317) Antibody5-間二甲
(標準品)Phospho-Chk1 (Ser317) Antibody2-氟-(三氟甲基)甲
標準溶液(100μg/ml,u=3%,基體:酮)Phospho-Chk1 (Ser280) Antibody溴-2-甲
毒死蜱(標準品)SETD2 (D5T1Q) Rabbit mAb2-基-5-吡啶
毒死蜱標準溶液(10μg/ml,u=6~3%,酮)Phospho-Chk1 (Ser345) (133D3) Rabbit mAb1,二甲基-
高效氟菊酯(標準品)Phospho-Chk1 (Ser345) (133D3) Rabbit mAb2-甲基-5-硝基三氟甲
高效氟菊酯標準溶液(100μg/ml,u=2%,基體:石油)Phospho-Chk1 (Ser345) (133D3) Rabbit mAb2,二-7H吡咯[2,D]嘧啶
高效氟菊酯(標準品)POMC (D3R1U) Rabbit mAb2-氟-6-甲酸
氟菊酯標準溶液(100μg/ml,u=4%,基體:正己烷)Phospho-Chk1 (Ser296) Antibody-甲酸甲酯
氟菊酯標準溶液(10μg/ml,u=5%,基體:正己烷)Phospho-Chk1 (Ser296) AntibodyN-甲基-氟芐
菊酯(標準品)HA-Tag (6E2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)?;?6-咪唑并[1,2-B]噠
菊酯(分析標準品,99.7%)Phospho-Threonine-X-Arginine Antibody4,4'-二甲氧基二甲酮
菊酯標準溶液(100μg/ml,u=3%)MEK1 (61B12) Mouse mAb1,2-二(溴甲基)
菊酯標準溶液(10μg/ml,u=6%)Na溴吲哚-2-羧酸酯
PL12/抗氨酰tRNA合成酶(PL12/AlaRS)ELISA試劑盒Phospho-MAP3K8/Tpl2 (Ser400) 酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶8100 ul
PC4,SFRS1互動(dòng)蛋白1(PSIP1)ELISA試劑盒Phospho-MAP3K8/Tpl2 (Thr290) 酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶820 ul
P53ELISA試劑盒MATH1 腸道分化干細胞MATH-1蛋白100 ul
P2蛋白(IgM)ELISA試劑盒Morphine 100 ul
P2蛋白(IgG)ELISA試劑盒Morphine 100 ul
P27蛋白(P27)ELISA試劑盒Morphine 100 ul
P0蛋白(IgM)ELISA試劑盒Torc2/Crtc2 CREB轉錄共激活因子TORC220 ul
P0蛋白(IgG)ELISA試劑盒Phospho-Torc2/Crtc2 (Ser171) 酸化CREB轉錄共激活因子TORC2100 ul
OJ/抗異亮氨酰tRNA合成酶(OJ/IleRS)ELISA試劑盒Morphine 100 ul
水泡病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)凱爾血型糖蛋白CD238抗體Baicalein中文名:黃芩素別名:分子式:C15H10O5
血型抗原前體蛋白抗體Farrerol 7-O-glucoside中文名:別名:分子式:C23H26O10
癌易感基因2和p21蛋白抑制因子抗體Erythrinin H中文名:別名:分子式:C17H12O7
β2微球蛋白抗體(單抗)Epimedoside A中文名:別名:分子式:C32H38O15
β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)素/β鏈接素/β-catenin抗體Kaempferide中文名:素別名:3,5,7-Trihydroxy-4'-methoxyflavone; 山柰素分子式:C16H12O6
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。