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羥基-嘧啶甲酸1,2-(standard for GC, ≥99.5% (GC))Phospho-HER2/ErbB2 (Tyr1221/1222) Antibody溴-5-硝基三氟甲仲戊(standard for GC,≥99.5%(GC))c-Fos (9F6) Rabbit mAb1-(吡啶基)酮Toll樣受體7(TLR7)ELISA試劑盒L
產(chǎn)品分類(lèi)
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時(shí)間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動(dòng)力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 鼠疫桿菌PCR檢測試劑盒規格 |
規格 | 50T |
貨號 | LZP7812 |
實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
鄰硝(Standard for GC, ≥99.5% (GC))Phospho-EGF Receptor (Tyr1068) (1H12) Mouse mAb2-異煙酸甲酯
對硝(standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-EGF Receptor (Tyr1045) Antibody間溴
間硝(Standard for GC)Phospho-EGF Receptor (Tyr1045) Antibody甲氧基酮
正壬(Standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-EGF Receptor (Ser1046/1047) Antibody溴甲酰
壬酸(Standard for GC ,>99%(GC))EGF Receptor (1F4) Mouse mAb基
(Standard for GC,≥99.8%(GC))PU.1 (9G7) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)二基溴化鎂
正辛烷(Standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-HER2/ErbB2 (Tyr877) Antibody2--氨基-5-溴吡啶
正辛(Standard for GC,>99.5%)HER2/ErbB2 Antibody酸異冰片酯
正辛酸(Standard for GC,≥99.5%(GC))HER2/ErbB2 Antibody基溴
十八烷(Standard for GC, ≥99.5% (GC))Phospho-HER2/ErbB2 (Tyr1221/1222) (6B12) Rabbit mAb2--氟異煙酸
仲辛(Standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-HER2/ErbB2 (Tyr1221/1222) (6B12) Rabbit mAb叔丁基磺酰
二十八烷(standard for GC,≥98.5%(GC))Phospho-HER2/ErbB2 (Tyr1221/1222) (6B12) Rabbit mAb1,7-庚二
草酸(Standard for GC,≥99.6%)Phospho-HER2/ErbB2 (Tyr1248)/EGFR (Tyr1173) Antibody2-肼鹽酸鹽
丁酸酯(Standard for GC, ≥99.5% (GC))Phospho-HER2/ErbB2 (Tyr1248) Antibody肼酸甲酯
正(Standard for GC,>99%(GC))Phospho-HER2/ErbB2 (Tyr1248) Antibody2--5-羥基三氟甲
正(standard for GC,>99.5%(GC))HER2/ErbB2 (44E7) Mouse mAb6-羥基-嘧啶甲酸
1,2-(standard for GC, ≥99.5% (GC))Phospho-HER2/ErbB2 (Tyr1221/1222) Antibody溴-5-硝基三氟甲
仲戊(standard for GC,≥99.5%(GC))c-Fos (9F6) Rabbit mAb1-(吡啶基)酮
Toll樣受體7(TLR7)ELISA試劑盒Lpin1 proin Lpin1 20 ul
Toll樣受體6(TLR6)ELISA試劑盒Lpin1 proin Lpin1 100 ul
Toll樣受體5(TLR5)ELISA試劑盒LPL/PLASTIN2 脂蛋白脂酶100 ul
Toll樣受體4(TLR4)ELISA試劑盒LPLUNC1 鼻咽癌癌基因100 ul
Toll樣受體3(TLR3)ELISA試劑盒LRIG1 LRIG1100 ul
Toll樣受體2(TLR2)ELISA試劑盒LRIG2 LRIG2100 ul
Toll樣受體1(TLR1)ELISA試劑盒LRIG3 LRIG320 ul
TH糖蛋白(THP)ELISA試劑盒LRP/MVP 肺耐藥相關(guān)蛋白100 ul
TGF-β誘導早期基因1(TIEG1)ELISA試劑盒LRP1/CD91 低密度脂蛋白相關(guān)受體1100µl
鼠疫桿菌PCR檢測試劑盒規格芳基硫酸酯酶A抗體Ambocin中文名:染料木素-7-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷別名:Genistein 7-O-β-D-apiofurasyl-(1→6)-O-β-D-glucopyraside分子式:C26H28O14
植物延長(cháng)蛋白(擬南芥)(-)-Sativan中文名:別名:分子式:C17H18O4
擬南芥ACA11抗體7,3',4'-Tri-O-methyleriodictyol中文名:5-羥基-7,3',4'-*氧基二氫黃酮別名:5-Hydroxy-7,3',4'-trimethoxyflavane分子式:C18H18O6
AHA3抗體(擬南芥)Alpine 3-acetate中文名:別名:Alpine 3-O-acetate分子式:C18H16O6
A-Raf抗體Afzelechin 3-O-xyloside中文名:阿夫兒茶精-3-O-木糖苷別名:分子式:C20H22O9