?
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
(梯度色譜級, ≥99.9%)ENPP1 (L520) Antibody二二己基硅烷

無(wú)水(無(wú)水級, 99.9%,H2O≤10ppm)Histone Deacetylase 1 (HDAC1) AntibodyDL-氨酰甘氨酸

無(wú)水(H2O:20-30ppm)IQGAP1 (D8K4X) XP® Rabbit mAb吲哚-酸

無(wú)水(無(wú)水級, 99.8%,H2O：30-50ppm)IQGAP1 (D8K4X) XP® Rabbit mAb羥基-2-甲基喹啉

茴香(分析標準品，用于萜分析，≥99.5% (GC))WIF1 Antibody(R)-羥基-2-

氨基-(三氟甲基)甲(98%)Ribosomal Proin L26 Antibody反式-基環(huán)己烷甲酸

(LC-MS)MRPL11 (D68F2) XP® Rabbit mAb4,4'-雙[N-(1-萘基)-N-氨基]-4''-基三

甲中標樣(分析標準品 基體：甲)eIF4E (C46H6) Rabbit mAb1,二甲基-2-(2-噻吩基)咪唑烷

2-氨基-基吡啶(97%)eIF4E (C46H6) Rabbit mAb2,二甲基呋喃

N,O-雙(*基硅烷基)三氟酰(96%)eIF3C Antibody-2-氟甲

山崳酸(標準品)DLK1 Antibody2,3,6-三氟溴芐

對溴(標準品)ENPP1 Antibody (Human Specific)三五氟酯

溴酚(標準品)Met (D1C2) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)1,二異基

對醌（用于光譜測定,≥99.5%(HPLC)）Mili Antibody吡啶-磺酸鈉

基叔丁基(標準品)MATK/CHK (D2I6U) Rabbit mAb8-甲氧基-并[g]

對羥基甲酸正丁酯(標準品)Histone Deacetylase 4 (HDAC4) Antibody2-羥基-3,5,5-*基-2-環(huán)己-1-酮

溴代異烷(標準品)Naked2 (C67C4) Rabbit mAbN-(METHOXYBENZYL) BORONOBENZAMIDE

酸芐酯(標準品)Naked2 (C67C4) Rabbit mAb-2-甲硫基嘧啶-5-羧酸酯

阿立新A(Orexin A)ELISA試劑盒KLF8  KLF樣轉錄因子8100 ul

κB抑制蛋白激酶(IKK)ELISA試劑盒KLF9  轉錄因子KLF9100 ul

γ谷氨酰轉移酶(GGT)ELISA試劑盒KLF13/RFLAT-1  腸道內富含的Kruppel樣因子13100 ul

γ-谷氨酰環(huán)化轉移酶(GGCT)ELISA試劑盒KLH  血藍蛋白100 ul

γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶(γ-GCS)ELISA試劑盒KLH  血藍蛋白100 ul

γ干擾素誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒KLK1  激肽釋放酶1100 ul

γ干擾素誘導單核細胞因子(MIG/CXCL9)ELISA試劑盒kappa Opioid receptor  kappa型阿片受體100 ul

γ干擾素受體(IFN-γR)ELISA試劑盒mu Opioid receptor  µ-型阿片受體100 ul

γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒Phospho-mu Opioid Receptor (Ser375)  酸化µ-型阿片受體100 ul
腮腺炎病毒PCR檢測試劑盒規格腎上腺髓質(zhì)素抗體Luteolin 5-methyl ether中文名：木犀草素-5-甲醚別名：分子式：C16H12O6

腺苷受體A3抗體Kaempferol 3-O-sophoroside中文名：酚-3-O-槐糖苷別名：Kaempferol 3-O-β-sophoroside分子式：C27H30O16

ADRA2腎上腺素能受體2抗體Violane中文名：別名：分子式：C17H16O6

腎上腺素能受體β1抗體Luteolin 5,3'-dimethyl ether中文名：木犀草素-5,3'-二甲醚別名：7,4'-Dihydroxy-5,3'-dimethoxyflavone分子式：C17H14O6

腎上腺素能受體β2抗體（β2-AR ）Kaempferol 3-O-sophoroside-7-O-glucoside中文名：別名：分子式：C33H40O21乳腺癌耐藥基因PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)