注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
溴菊酯標準溶液(100μg/ml,基體：石油)F4/80 (BM8.1) Rat mAb (APC-Cy7® Conjuga)2--5-基酸

草萘(標準品)α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAbCHLORO-5-BUTOXYPHENYLBORONIC ACID, PINACOL ESR

除蟲(chóng)脲標準溶液(100μg/ml,u=2%，基體：酮)α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb2,二-1-

除蟲(chóng)脲標準溶液(10μg/ml,u=3%)ST14/Matriptase Antibody環(huán)己基-D-氨酸水合物

2，滴酸(標準品)BST2 (D5V5Z) Rabbit mAb基二硫

2，滴酸(98%)Arginase-2 Antibody甲基吲哚-2-甲

二噻農(標準品)PCSK7 (D4I5G) Rabbit mAb2,5-二(基)-1,3,惡二唑

棉隆(標準品)HELQ (D4K2O) Rabbit mAb2-氟-6-(三氟甲基)

雙酚(標準品)Di-Methyl-RPL29 (Lys5) (D8T9P) Rabbit mAb甲基酰氧基基三氧基硅烷

異凈(標準品)Cas9 (<i>S. pyogenes</i>) (E7M1H) XP® Rabbit mAbNα-(叔丁氧羰基)-L-色氨酸 N-琥珀酰亞酯

異菌脲標準溶液(100μg/ml,u=4%)Cas9 (<i>S. pyogenes</i>) (E7M1H) XP® Rabbit mAb-2,6-二氟酸

異(標準品)Glucocorticoid Receptor (D8H2) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)5-RT-BUTYL-(NITROPHENYL)-1,2,OXADIAZOLE

1,二-d4(標準品)MEKK2 Antibody(CHLORO-METHYLPHENYL)-1H-1,2,TRIAZOL-5(4H)-ONE

2,2,3,3,4,4,5,56,6-十溴代-1,1-聯(lián)(標準品)Androgen Receptor (AR-V7 Specific) (E3O8L) Rabbit mAb4,4'-亞甲基雙(2,6-二甲基)酚

二環(huán)戊二環(huán)氧化物(97%)Cystathionine γ-Lyase (D1N1D) Rabbit mAb鄰芐基

1,2-二烷(standard for GC,>99.9%(GC))CD16A (D8W2O) Rabbit mAb吡啶

1,2-二烷(for HPLC,≥99.9%)Calreticulin (D3E6) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)2,二氟-6-酚

1,2-二烷標準熔液(1.00mg/ml,基體：甲)Phospho-STING (Ser366) (D7C3S) Rabbit mAb雙(2,4,6-三)草酸酯

白介素3(IL-3)ELISA試劑盒IRF7  干擾素調節因子7100 ul

白介素2誘導的T細胞激酶(ITK)ELISA試劑盒Phospho-IRF7 (Ser471/472)  酸化干擾素調節因子7100 ul

白介素2受體(IL2R)ELISA試劑盒IRS P53  胰島素受體底物p53蛋白100 ul

白介素2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ)ELISA試劑盒IRS1  胰島素受體底物-120 ul

白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA試劑盒phospho-IRS1(Ser307)  酸化胰島素受體底物-1100 ul

白介素29(IL-29)ELISA試劑盒phospho-IRS1(Ser1101)  酸化胰島素受體底物-1250 ml

白介素28B(IL-28B)ELISA試劑盒phospho-IRS1(Ser302)  酸化胰島素受體底物-125 ml

白介素28A(IL-28A/IFN-λ2)ELISA試劑盒phospho-IRS1(Ser332/336)  酸化胰島素受體底物-15 mg

白介素26(IL-26)ELISA試劑盒phospho-IRS1(Ser612)  酸化胰島素受體底物-15 mg
日本血吸蟲(chóng)PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家纖維蛋白原β鏈抗體Cefotaxime sodium中文名：頭孢噻肟鈉別名：分子式：C16H17N5NaO7S2

叉頭蛋白B1抗體Triamcilone acetonide中文名：曲安奈德別名：分子式：C24H31FO6

髓鞘缺陷相關(guān)蛋白抗體Tryptophan中文名：別名：(+)-Tryptophan分子式：C11H12N2O2

叉頭蛋白B1+B2抗體4,6-Dichloro-2-(propylthio)pyrimidin-5-amine中文名：別名：分子式：C7H9Cl2N3S

叉頭蛋白G1抗體4,6-Dichloro-5-nitro-2-propylthiopyrimidine中文名：別名：分子式：C7H7Cl2N3O2S
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。