?
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
化溶液(3.3mol/L(3.3N))Phospho-Beclin-1 (Ser93) (D9A5G) Rabbit mAb-6-甲基嘧啶

化溶液(3mol/L(3N))CYP1A2 (D2V7S) Mouse mAb萘亞

重鉻酸(分析標準品,99.998%)LC3C (D1R8V) Rabbit mAb甲基酸氧雜環(huán)丁烷酯

重鉻酸標準溶液(0.1mol/L)Phospho-FoxO3a (Ser7) Antibody-3,5-二氟

重鉻酸標準溶液(1/24mol/L(0.25N))YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)5-(磺?；?-2-氟甲酸

重鉻酸標準溶液(1/60mol/L(0.1N))β2-microglobulin (D8P1H) Rabbit mAb (PE Conjuga)2,5,6-三氨基-羥基嘧啶硫酸鹽

硫酸標準溶液(0.1000mol/L(0.1N))Rb (4H1) Mouse mAb (PE Conjuga)1,2-雙(*基硅氧基)烷

硫酸標準溶液(100g/L)Phospho-CD79A (Tyr182) (D1B9) Rabbit mAb三羥甲基烷三縮水甘油

高錳酸標準溶液(1/5KMnO4：0.1mol/L)Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb (APC Conjuga)-9基咔唑

高錳酸標準溶液(0.02000mol/L(0.1N))PTP-PEST (D4W7W) Rabbit mAb[(芐氧基)基]酸

高錳酸標準溶液(0.1000mol/L(0.5N))LC3C (D3O6P) Rabbit mAb二鹽基性硬脂酸鉛

化溶液(100g/L)RTF1 (D7V3W) Rabbit mAb溴-三氟

化溶液(1/60mol/L(0.1N))Mitofusin-1 (D6E2S) Rabbit mAb-2-

玫紅酸(AR)Phospho-SLP-76 (Ser376) (D9D6E) Rabbit mAb2-溴吡啶-甲

玫紅酸(指示劑級)Phospho-SLP-76 (Ser376) (D9D6E) Rabbit mAb5-羥基喹喔啉

氫氧化鈉標準溶液(1.000mol/L(1N))SignalStain® Citra Unmasking Solution (10X)2-基吩噻

氫氧化鈉標準溶液(0.5000mol/L(0.5N))SignalStain® Citra Unmasking Solution (10X)2--6-氨基并噻唑

氫氧化鈉標準溶液(0.2000mol/L(0.2N))SignalStain® EDTA Unmasking Solution (10X)雙草酸氧化鈦(IV)酸二水合物

大內皮素(Big ET-1)ELISA試劑盒IFABP  小腸型脂肪酸結合蛋白100 ul

大腸癌專(zhuān)一抗原4(CCSA-4)ELISA試劑盒IFABP  小腸型脂肪酸結合蛋白100 ul

大腸癌專(zhuān)一抗原3(CCSA-3)ELISA試劑盒IFI16/p16  γ干擾素誘導蛋白1610 mg

大腸癌專(zhuān)一抗原2(CCSA-2)ELISA試劑盒IFITM1/CD225  干擾素誘導跨膜蛋白110 mg

存活素/生存蛋白(Surv)ELISA試劑盒IFN-Beta  干擾素-β（抗）1 ml

脆性組氨酸三聯(lián)體(FHIT)ELISA試劑盒IFN-Alpha  干擾素-α（抗）1 ml

催素誘導蛋白(PIP)ELISA試劑盒IFN-Alpha 2b  干擾素α2b100 ul

催素抑制激素(PIH)ELISA試劑盒IFN-Beta  干擾素-β（、）100 ul

催素釋放激素(PRH)ELISA試劑盒IFN gamma  γ-干擾素100 ul
人博卡病毒PCR檢測試劑盒價(jià)格腦膠質(zhì)瘤發(fā)病相關(guān)蛋白2抗體Estrone中文名：雌酮別名：分子式：C18H22O2

β葡萄糖醛酸苷酶抗體Cynatratoside A中文名：白薇苷A別名：分子式：C28H40O8

G蛋白偶聯(lián)受體120抗體Sprengerinin A中文名：別名：分子式：C38H60O12

G0/G1期開(kāi)關(guān)調節蛋白2抗體Sprengerinin C中文名：別名：分子式：C44H70O16

20號染色體開(kāi)放閱讀框100抗體Prosapogenin A中文名：薯蕷次皂苷A別名：Ophiopogonin C'分子式：C39H62O12