組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

?

實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
西地尼布C23H28O11(R)-(-)-芐氧甲基環(huán)氧烷

塞來(lái)昔布，塞內昔布，賽利克西C5H11NO22-硝基亞氨基咪唑烷

塞來(lái)昔布，塞內昔布（標準品）C13H18O72-代-2-甲基丁烷

丁酸氮芥C12H16O71,2-雙(*基硅氧基)烷

鹽酸金霉素,鹽酸四環(huán)素C9H6O2基三丁酮肟基硅烷

鹽酸金霉素(標準品)C21H25,1-二基己烷

西洛他唑C33H40O152,2-雙(氧基)烷

西洛他唑（標準品）C16H12O61-芐氧羰基-羥基氮雜環(huán)丁烷

順鉑(進(jìn)分)C27H32O14正十二烷基*氧基硅烷

順鉑C30H26O13(R)-2-BOC-氨甲基吡咯烷

順鉑（標準品）C30H26O12*硅烷基

西酞普蘭C19H23NO4·HCl三基硅烷

西酞普蘭（標準品）C20H18NO4Cl三(甲基）

克拉曲濱,克拉利賓C19H14NO4基三(2-甲氧基氧基)硅烷

克拉霉素C24H28O11三（*代甲硅烷基）

克拉霉素（標準品）C25H30O13正三十三烷

克林霉素酸酯C22H18O11環(huán)氧基-7-氧雜二環(huán)[4,1,0]庚烷

克林霉素酸酯(標準品)C22H18O10順式-2,環(huán)氧丁烷

豬雌二受體(ER)ELISA試劑盒ABL2  ABL2蛋白100 ug

豬雌二(E2)ELISA試劑盒ABI1  ABI1/SSH3BP1蛋白100 ul

豬成纖維細胞生長(cháng)因子19(FGF19)ELISA試劑盒ABP  雄激素結合蛋白100 ug

豬腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒Adenylyl cyclase/AC  腺苷酸環(huán)化酶100 ug

豬腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒ACE1  血管緊張素轉換酶ACE1100 ug

豬補體因子H(CFH)ELISA試劑盒ACA11  擬南芥ACA11100 ug

豬補體片斷5b(C5b)ELISA試劑盒AHA3  AHA3（擬南芥）100 ug

豬補體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒ACE2  ACE2100 ug

豬補體蛋白4(C4)ELISA試劑盒ACEI  血管緊張素1轉換酶抑制劑100 ug
副流感病毒Ⅰ型PCR檢測試劑盒價(jià)格卵黃狀黃斑病蛋白4抗體Garbanzol中文名：鷹嘴豆醇別名：分子式：C15H12O5

卵黃狀黃斑病蛋白3抗體Apigenin 4'-O-rhamside中文名：芹菜素-4'-O-鼠李糖苷別名：分子式：C21H20O9

BEND2蛋白抗體3,4,4',7-Tetrahydroxyflavan中文名：別名：3-Epiguibourtacacidin分子式：C15H14O5

晶狀體蛋白2抗體Isoastilbin中文名：異落新婦苷別名：分子式：C21H22O11

7號染色體開(kāi)放閱讀框27抗體Vestitol中文名：別名：(-)-Vestitol分子式：C16H16O4