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單純皰疹病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:SCCAg檢測試劑盒產(chǎn)物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細胞中檢出一個(gè)靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細菌。
產(chǎn)品分類(lèi)
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時(shí)間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動(dòng)力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 單純皰疹病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū) |
規格 | 50T |
貨號 | LZP7547 |
實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
Oxalic acid dihydrate硫酸新霉素 USP級,680 I.U./mg砜 AR,99%
Tannic acid鹽酸土霉素 95%硫脲 CP,98%
Molybdic acid利福平 97%卵磷脂 from soybean,>90%
Silicic acid硫酸鏈霉素 720 I.U./mg5,10,15,20-四(4-吡啶基)卟啉 97%
Silicotungstic acid hydrate無(wú)檸檬酸 AR, ≥99.5% (T)苯酞 99%
Tungstic acid檸檬酸,一 AR,99.5%2-溴-3-甲基丁酸 98%
2-Butynedioic acid檸檬酸 AR,99.5%氯化磷酰膽堿鈣鹽,四 98%
α-Bromoisobutyric acid氮化鋁 N >33.0%, D50/2.0 μmD-果糖-1,6-二磷酸三鈉鹽,無(wú) 98%
Chrysophanic acid氮化鋁 N >32.5 % ,D97/5.0 μm磷酸吡哆 98%
Cinnamic acid氮化 1 μm, 98.5%磷酸吡哆 98%,用于細胞培養
Citrazinic acid六方氮化 99.9% metals basis,1~2μm5’-磷酸吡哆,一 98%
Tricyanic acid氮化硅 α-phase,92%,325 mesh吡哆胺 98%
1,1-Cyclobutanedicarboxylic acid氮化硅 β-phase,95%,1-3μm鹽酸吡哆 99%
trans-Ferulic acid碳化鈦 99%,2-4μm對硝基氯苯 GR,99.5%
Ferulic acid氮化鈦 99.5%,2-10 μm2,4-二硝基氯苯 GR,99%()
Heptadecaic acid碳氮化鈦 powder, 1-2 μm, 99%2-萘胺-1-磺酸 98%
鄰苯二甲(>99.0%(GC))CD5 (E8X3S) XP® Rabbit mAbKBTBD4 BTB-kelch蛋白家族4抗體
2-氨基吡啶(>99.0%(GC)(T))CD5 (E8X3S) XP® Rabbit mAbKBTBD10 BTB-kelch蛋白家族10抗體
2-氨基苯硫酚(>95.0%(T))Rab3A AntibodyKBP KBP蛋白抗體
丹磺酰肼(>95.0%(HPLC)(T))SirT1 (D60E1) Rabbit mAb (Mouse Specific)Kazrin Kazrin蛋白抗體
DBD-H [=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-肼基-2,1,3-苯并惡二唑(>98.0%(HPLC))Vimentin (R28) AntibodyKATNA1/Katanin p60 A1 劍蛋白p60亞基A1抗體
NBD-H (=4-肼基-7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑肼)(>98.0%(HPLC))Ubiquitin Antibodykatanin p80 劍蛋白p80抗體
1,3-環(huán)己二酮(>98.0%(GC)(T))PHF20 (D96F6) XP® Rabbit mAbKAT4 細胞周期基因1蛋白抗體
ABD-F[=4-(氨磺酰)-7-氟-2,1,3-苯并惡二唑](>98.0%(N)(T))Phospho-Tau (Ser202) (D4H7E) Rabbit mAbKAT3B/Ep300 轉錄接頭蛋白EP300抗體
二茂鐵乙酸(>97.0%(GC))Phospho-Keratin 20 (Ser13) (D9M6O) Rabbit mAbKAT2B/ GCN5/PCAF 組蛋白乙酰轉移酶PCAF抗體
(肼基羰基)二茂鐵(>95.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標記)HMGB1 AntibodyKAT13D/CLOCK 生物鐘KAT13D蛋白抗體
單純皰疹病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)G蛋白偶聯(lián)受體GPR10蛋白抗體2',3'-Di-O-acetyl-5'-deoxy-5-fluorocytidine中文名:別名:分子式:C13H16FN3O6
G蛋白偶聯(lián)受體C5L2蛋白抗體Capecitabine中文名:卡培他濱別名:分子式:C15H22FN3O6
G蛋白偶聯(lián)受體EX33蛋白抗體4-(N-Methyl)-amiantipyrine中文名:別名:分子式:C12H15N3O
G蛋白偶聯(lián)受體GPR102蛋白抗體Valsartan methyl ester中文名:別名:分子式:C25H31N5O3
G蛋白偶聯(lián)受體GPR37樣蛋白1抗體α-D-Glucose中文名:α-D-葡萄糖別名:分子式:C6H12O6