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彈狀病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:MSH檢測試劑盒陰性質(zhì)控品:無(wú)明顯擴增曲線(xiàn)或無(wú) Ct 值顯示;
產(chǎn)品分類(lèi)
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 彈狀病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū) |
規格 | 50T |
貨號 | LZP7551 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
Tiron石油 AR,bp 90-120 °C十八胺 ≥97.0% (GC)
Ferrocene酸烯酯 98%辛胺 99%
Lead氯甲酸芐酯 96%十八胺 ≥99.0% (GC)
Lead2-氯異酸乙酯 97%1,3-二胺 98%
Lead環(huán)戊 99%聚二烯二甲基氯化銨溶液 Mw <100,000 ,35 wt. % 溶液,100-200
LeadN,N-二苯基氯甲酰胺 98%聚二烯二甲基氯化銨溶液Mw 100,000-200,000 ,20 wt. % 溶液,6
Lead acetate trihydrate氯甲酸異丁酯 98%Mw 200,000-350,000 ,20 wt. % 溶液,250-500 cP (25 °C)
Lead oxide red氯甲酸異酯 97%Mw 400,000-500,000 ,20 wt. %溶液,800-1000 cP (25 °C)
Lead oxide yellow4-甲基環(huán)己酮 98%三月桂胺 95%
Lead(II)borate氯甲酸-4-硝基芐酯 97%三辛胺 90%
Lead(II)carbonate吡唑 99%十四胺 96%
Lead chromate1,5-戊二 97%鈦酸鋇 粉末, <2 μm, 99.5% metals basis
Lead hydroxide氯甲酸苯酯 98%鈦酸鋇 99.99% metals basis
Lead(II)iodide氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯 97%納米鈦酸鋇 99.9% metals basis,<100 nm
Lead(IV)acetate氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯 99%D-木糖 98%
Lead(II)acetate basic2,2,2-三 98%異煙酸 AR,99%
乙(>99.5%(GC))Neogenin (D7M8E) Rabbit mAbJunctophilin 3 連接蛋白JPH3抗體
庚烷(>99.0%(GC))Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb (Biotinylated)Jun D 活化蛋白激酶D抗體
乙酸乙酯(>99.5%(GC))Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb (Biotinylated)Jun B 活化蛋白激酶B抗體
乙酸丁酯(>99.0%(GC))HDAC3 (7G6C5) Mouse mAbJNK3/MAPK10 氨基末端激酶3抗體
乙酸異戊酯(>98.0%(GC))HDAC3 (7G6C5) Mouse mAbJNK2 氨基末端激酶2抗體
乙(>99.5%(GC))SOCS1 (A156) AntibodyJNK1/3 氨基末端激酶1/3抗體
苯(>99.5%(GC))SOCS1 (A156) AntibodyJNK1/2/3 氨基末端激酶1/2/3抗體
1-丁(>99.0%(GC))MST2 AntibodyJMY 連接介導調節蛋白抗體
溴(含穩定劑二苯胺)(>99.0%(GC))MST2 AntibodyJMJD7 組蛋白去甲基轉移酶JMJD7抗體
環(huán)己烷(>99.5%(GC))HA-Tag (C29F4) Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjugate)JMJD6 凋亡細胞清除受體抗體
彈狀病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)4號染色體開(kāi)放閱讀框21抗體Burchellin中文名:別名:分子式:C20H20O5
緊密連接蛋白2抗體(±)-Piresil中文名:(±)-松脂素別名:松脂酚分子式:C20H22O6
緊密連接蛋白7抗體Isodihydrofutoquil B中文名:別名:Lancifolin E分子式:C21H24O5
補體C3cα片段2抗體Isodihydrofutoquil A中文名:別名:Lancifolin F分子式:C21H24O5
補體C3cα 鏈片段1抗體5'-Methoxylariciresil中文名:5'-甲氧基落葉松樹(shù)脂醇別名:分子式:C21H26O7
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。