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太米阿米病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:LMA檢測試劑盒從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶,屬于正?,F象,微加熱至40℃使結晶*溶解后再配制洗滌液。
產(chǎn)品分類(lèi)
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 太米阿米病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū) |
英文名稱(chēng) | Tamiami virus(TAMV)RTPCR |
貨號 | LZP7367 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
Linalool反式 standard for GC正己烷 AR,97%
L-Menthol溴酚紅 AR,80%甲基環(huán)戊烷 Standard for GC
Loliolid考馬斯亮藍R250 AR甲基環(huán)戊烷 94%
Menthone溴甲酚綠鈉 AR甲基環(huán)戊烷 98%
Mudanpioside C溴甲酚綠鈉 98%,高純級甲基環(huán)戊烷 分析標準品,≥99.5% (GC)
Mullilam diol溴甲酚綠鈉 ACS reagent, 90 %2-甲基戊烷 82%
rcantharidin溴甲酚綠鈉 Indicator碳酸鈷(II) CP,Co 43.0 - 47.0 %
Oleuropeic acid 8-O-glucoside鹽酸副品紅(0.2%鹽酸副玫瑰 0.2% 1mol/L,0.2%鹽酸副玫瑰苯胺溶液金屬錳片 99.9% metals basis,不規則片狀
Oleuropeic acid甲酸丁酯 Standard for GC四氧化三錳 SP
Oxypaeoniflorin溴甲酚紫鈉鹽 AR四氧化三錳 Mn ≥71.0%, BET surface Area 5~7 m2/g
Paeoniflorigene溴百里香酚蘭鈉 AR硫酸鎳,七 ACS
Paeoniflorin溴百里酚藍鈉鹽 ACS4-羥基吡啶 97%
Paeonilactone A2-丁酮 Standard for GC, ≥99.9% (GC)硫代蘋(píng)果酸 98%
Paeonilactone B戊酸丁酯 Standard for GC, ≥99.5% (GC)酸鈉 AR,99.0%
Paeonilactone C正丁 Standard for GC乙鎂 98%
p-Menth-1-ene-3,6-diol溴酚藍鈉 AR碲化鎘 99.9999%,6N
2,2,3,3,3-五氟-1-VCP (7F3) Rabbit mAbPGAM1/PGAM2 磷酸變位酶1抗體
1,1,2-三氯三氟乙烷(CFC-113)Histone H3 Antibody (ChIP Formulated)PFKL/Fructose 6 Phosphate Kinase 6磷酸果糖激酶抗體
苯胺(標準品)USP4 AntibodyPFKFB2 果糖-2,6-二磷酸酶心肌酶抗體
烯標準溶液(標準品)Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAbPFKFB1 果糖-2,6-二磷酸酶1抗體
磷酸氫二銨Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAbPFK2/PFKFB3 6磷酸果糖激酶2抗體
Amberlite?IRA402 強堿型陰離子交換樹(shù)脂(氯型)Stat4 (C46B10) Rabbit mAbPescadillo 雌激素受體共調節因子抗體
Amberlite XAD-1180N 非離子型多孔樹(shù)脂(粒徑0.350 - 0.600 mm)CD161/KLRB1 (HP-3G10) Mouse mAb (violetFluor™ 450 Conjugate)Persephin PSP抗體
嘧菌酯(標準品)Ron (C81H9) Rabbit mAbPERP/p53 apoptosis effector related to PMP22 p53凋亡相關(guān)作用蛋白PMP22抗體
雙甲脒標準溶液(10μg/ml,u=4%)BCL6 (D4I2V) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)Peroxiredoxin 2/PRXII 硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶Ⅱ/巰基抗氧化蛋白抗體
雙甲脒標準溶液(100μg/ml,u=2%)CK1 AntibodyPerlecan/Heparan Sulfate Proteoglycan 2 硫酸乙酰肝素蛋白多糖2
太米阿米病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)2,3-Dimethyl-4-nitroanisole,95%通用試劑 10G
2,6-Difluoroanisole,98%通用試劑 1G
2,5-Difluoroanisole,98%通用試劑 5G
2,4-Difluoroanisole,99%通用試劑 5G
2-Chloro-5-nitroanisole,98%通用試劑 5G
2-Chloro-5-fluoroanisole,97%通用試劑 5G
2-Chloro-4-fluoroanisole,97%通用試劑 5G
4-Bromo-3-nitroanisole,97%通用試劑 5G
2-Bromo-5-nitroanisole,98%通用試劑 1G
4-Bromo-2,5-difluoroanisole,99%通用試劑 5G
4-Bromo-2-methylanisole,98%通用試劑 5G
2-Bromoethyl ether,90%通用試劑 5ML
2-Bromo-4-fluoroanisole,96%通用試劑 5G
2-Bromo-5-fluoroanisole,99%通用試劑 5G
2,3-Dimethylanisole,97%通用試劑 5G
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。