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立克次體通用PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:MS檢測試劑盒當即參加50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,悄悄振動(dòng)混勻,37℃溫育1小時(shí)
產(chǎn)品分類(lèi)
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 立克次體通用PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū) |
英文名稱(chēng) | Rickettsia spp.PCR |
貨號 | LZP7235 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
Dimethylglyoxime disodium salt octahydrate2,4-二氯 98%二甲基烯酸甘油酯 90%
1,3-Diphenylurea對甲 97%甲基烯酸己酯 98%
Dithiooxamide對甲 ≥97%,Kosher二甲基烯酸1,6-己二酯 95%
Domoic acid對甲 99%二烯酸1,6-己二酯 90%
Ferene S3-氨基-4-甲氧基-N-苯基苯甲酰胺 98%甲基烯酸羥乙酯 96%
Fluorene鄰甲氧基苯胺 GR,99%甲基烯酸異癸酯 98%,含150ppm MEHQ穩定劑
5-Hydroxymethylfurfural2-氨基-4-硝苯 98%甲基烯酸異冰片酯 85-90%,含150-200 ppm MEHQ穩定劑
Hexaamminecobalt(III) chloride2-氨基-4-硝苯 分析標準品二甲基烯酸新戊二酯 90%
HistoChoice® Dermatology Fixative對甲氧基苯胺 AR,99.0% 二烯酸新戊二酯 89%
HistoChoice® MB tissue Fixative4-氯-2-胺 99%甲基烯酸十八烷基酯 96%
HistoChoice® clearing agent對氯苯胺 98%三乙二二甲基烯酸酯 95%,stabilized with 60-100 ppm MEHQ
HistoChoice® mounting media2,5-二氯苯胺 98%二甲基烯酸四乙二酯 包含~0.006% 對苯二酚 穩定劑, 90%
Iodoacetyl LC Biotin2,5-二氯 99%烯酸四酯 98%,含500ppm氫醌單甲MEHQ穩定劑
Ferrous oxalate dihydrate4-(2-羥乙基)-1-哌磺酸 ≥99.0% (T) 甲基烯酸四酯 97%
Ferric tartrate2-甲基-4-胺 99%二甲基烯酸鋅 95%
Lanthanum acetate hydrate4-甲基-2-胺 98%2-萘胺-1-磺酸 98%
EDTA,乙二胺四乙酸M-RIP (D8G8R) Rabbit mAbPI3 Kinase p110 beta 磷脂酰肌激酶(PI3Kβ)抗體
咪唑Eg5 (E1L3W) Rabbit mAbPI 3 Kinase p85 beta 磷脂酰肌激酶p85β抗體
L(+)-阿拉伯糖NRF2 (D1Z9C) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)PHYH 植烷酸氧化酶抗體
去離子甲酰胺Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control (Pacific Blue™ Conjugate)phospho-β catenin(Tyr142) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體
石蠟油Ras (G12V Mutant Specific) (D2H12) Rabbit mAbPhospho-Zyxin (Ser142/Ser143) 磷酸化斑聯(lián)蛋白抗體
乙酸Nav1.5 (D9J7S) Rabbit mAbPhospho-Zap-70(Tyr493) 磷酸化zeta相關(guān)蛋白70抗體
無(wú)乙酸鈉Zap-70 (D1C10E) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)Phospho-Zap-70 (Tyr315/Tyr319) 磷酸化zeta相關(guān)蛋白70抗體
氯化c-Myc (D84C12) Rabbit mAb (Pacific Blue™ Conjugate)phospho-YWHAE(Thr232) 磷酸化14-3-3E蛋白抗體
低熔點(diǎn)瓊脂糖;具有低凝膠溫度的瓊脂糖Ras (G12D Mutant Specific) (D8H7) Rabbit mAbphospho-YES1(Tyr537) 磷酸化原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體
無(wú)磷酸二氫SF3B1 (D7L5T) Rabbit mAbphospho-YES1(Tyr426) 磷酸化原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體
立克次體通用PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)兔血清總補體(CH50)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1米
兔血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:25克
兔血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
兔氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:500毫升
兔一氧化氮()ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:200張/盒
兔一氧化氮合成酶(S)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:保存:-20℃1克
兔胰淀素(Amylin)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:
兔乙酰膽堿(ACh)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:25克
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。