注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
13(18)-Oleanen-3-ol2,2'-二萘胺 98%石英砂 AR,6-10目,2-3mm

13(18)-Oleanen-3-one3-二甲基氨基-1- 99%石英砂 AR,8-16目或1-2mm

14,17-Epidioxy-28-r-15-taraxerene-2,3-diol4-甲基二苯胺 98%2-氨基吡啶 CP

15-Deoxoeucosterol3-甲基二苯胺 98%甲酯 99%

16-O-Acetylpolyporenic acid C4-甲氧基-4'-甲基二苯胺 98%氨基黑10B AR

16-Oxoalisol A4-甲氧基二苯胺 98%石杉堿甲 99%

20,24-Dihydroxydammar-25-en-3-one甲基烯酸酐 94%蛻皮激素 分析標準品,≥95% (HPLC)

20,24-Epoxy-24-methoxy-23(24-25)abeo-dammaran-3-one4-硝基三苯胺 98%蛻皮激素 ≥93% (HPLC), 粉末

20(29)-Lupene-3,23-diol三(4-基)胺 97%蛻皮激素 ≥95% (HPLC), 粉末

20-Hydroxy-3-oxo-28-lupaic acid三(4-苯)胺 98%芍藥苷  分析標準品，≥98%

20R-Ginseside Rg2三(4-甲酰苯基)胺 97%芍藥苷  ≥98% (HPLC)

(20R)-Ginseside Rh1N,N,N,N-四苯基聯(lián)苯胺  98%仲丁 standard for GC, ≥99.8% (GC)

20(R)-Ginseside Rg31 3 5-三((3-基)苯基氨基]苯  97%仲丁 99.5%,無(wú)級

20S,24R-Epoxydammar-12,25-diol-3-one4,4',4''-*基三苯胺 98%仲丁  99%

20(R)-Ginseside Rh21,3,5-三(N,N-二苯基氨基)苯 97%仲丁 CP，99%

(20S)-Protopanaxatriol三苯胺 98%仲丁 分析標準品，≥99.9% (GC)

氫氧化鈣(>95%,BR)Phospho-Skp2 (Ser64) AntibodyPhospho-Rb(Thr826)  磷酸化視網(wǎng)膜母細胞瘤相關(guān)蛋白1抗體

低粘度羥基纖維素CDC20 (D6C2Q) Rabbit mAbPhospho-Rb(Ser795)  磷酸化視網(wǎng)膜母細胞瘤相關(guān)蛋白1抗體

L(+)二鈉二(>98%,BC )Sec61A1 (D4K2Z) Rabbit mAbPhospho-Rb(Ser788)  磷酸化視網(wǎng)膜母細胞瘤相關(guān)蛋白1抗體

亞硝酸(>96%,BR)Sec61A1 (D7Q6V) Rabbit mAbPhospho-Rb(Ser612)  磷酸化視網(wǎng)膜母細胞瘤相關(guān)蛋白1抗體

鹽酸吡哆胺(>98%,BC )MLLT1/ENL (D9M4B) Rabbit mAbphospho-Rb(Ser249)  視網(wǎng)膜母細胞瘤相關(guān)蛋白1抗體

楊酸鈉(>99%,USP)COBRA1 (D6K9A) Rabbit mAbPhospho-Rb (Thr821)  磷酸化視網(wǎng)膜母細胞瘤相關(guān)蛋白1抗體

3-(環(huán)己氨基 )-1-磺酸鈉(分子生物學(xué)級)BCL6 (D4I2V) XP® Rabbit mAbPhospho-Rb (Ser807/Ser811)  磷酸化視網(wǎng)膜母細胞瘤相關(guān)蛋白1抗體

血紅素(>95%,BR)BCL6 (D4I2V) XP® Rabbit mAbPhospho-Rb (Ser608)  磷酸化視網(wǎng)膜母細胞瘤相關(guān)蛋白1抗體

聚乙二800MIST1/bHLHa15 (D7N4B) XP® Rabbit mAbPhospho-RASGRF1(Ser929)  磷酸化Ras特異性鳥(niǎo)嘌呤核苷酸釋放因子1

炔雌;炔雌環(huán)戊MIST1/bHLHa15 (D7N4B) XP® Rabbit mAbPhospho-RasGRF1(Ser916)  磷酸化Ras特異性鳥(niǎo)嘌呤核苷酸釋放因子1
哈達爾沙門(mén)氏菌PCR檢測試劑盒價(jià)格小鼠17羥孕(17-OHP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT1克

小鼠25羥基維生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT1克

小鼠5核苷酸酶(5-NT)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1米

小鼠5羥色(5-HT)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

小鼠6前列腺素(6-K-PG)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：

小鼠6前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃，避光1克

小鼠8羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：10張/盒

小鼠8異前列腺素(8-iso-PG)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1公斤
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。