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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
2’,3’-DehydrosalanlD-氨酸 98%肼黃 85%

2,3-Dihydroxy-12-oleanen-28-oic acidD-天冬酰胺,一 99%柯衣定 AR

2,3-Di-O-methylthiomethyleuscaphic acidD-谷氨酸 98%香紫蘇內酯 97%

2,3-O-Isopropylidenyl euscaphic acidD-哌啶酸  99%S-聯(lián)萘酚 99%

2,24-Dihydroxyursolic acidL-高脯氨酸 98%雙(二苯基膦) 98%

2-Epitormentic acidD-脯氨酸 99%1,2-雙(二苯基膦)乙烷  98%

2alpha-hydroxy-3beta-acetyloxy-betulic acidD-纈氨酸 98%1,1'-雙(二-叔丁基膦基)二茂鐵 98%

2’’-O-acetyl-platyconic acid A對溴苯酚 98%1,5-雙(二苯基膦)戊烷  97%

2-Oxopomolic acid對溴苯酚 分析標準品1,6-雙(二苯基膦基)己烷  97%

2-Picenecarboxylic acid溴乙 97%1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵 97%

3,4-Secocucurbita-4,24-diene-3,26,29-trioic acidN-溴代丁二酰亞胺 AR,99.00%雙(三苯基膦)氯化銨 96%

3,4-Secotirucalla-4(28,7,24-triene-3),26-dioic acidN-溴代丁二酰亞胺 CP,98.5%1,4-雙(二苯膦基)丁烷 96%

3,6,19,23-Tetrahydroxy-12-ursen-28-oic acid3,5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉 99%(R)-(+)-2,2'-雙(二苯膦基)-1,1'-聯(lián)萘 98%

3,6,19-Trihydroxy-23-oxo-12-ursen-28-oic acidN-羥基琥珀酰亞胺 98%R-1,1'-聯(lián)-2-萘酚 99%

3,19-Dihydroxy-6,23-dioxo-12-ursen-28-oic acidN-代丁二酰亞胺 97%(S)-(-)-2,2'-雙(二苯膦基)-1,1'-聯(lián)萘 98%

3,21-Dihydroxy-14-serraten-16-one喹啉 AR,96%1,3-雙(二苯膦基)烷 97%

磷酸二氫鈉一(ACS級)MKL1/MRTF-A AntibodyPhospho-SEK1/MKK4 (Ser257)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體

葡萄糖酸鈣PRMT7 (D1K6R) Rabbit mAbphospho-SCNN1B(Thr615)  磷酸化上皮鈉通道β2抗體

乙二胺四乙酸四鈉鹽二LARP1 Antibodyphospho-SCNN1B(Ser633)   磷酸化上皮鈉通道β2抗體

十二烷基-β-D-麥芽糖苷;月桂?；溠刻擒誚ti1a (D8U3M) Rabbit mAbPhospho-SATB1 (Ser47)  磷酸化核基質(zhì)結合區結合蛋白1抗體

鹽酸氨基脲Phospho-Mcl-1 (Thr163) (D5M9D) Rabbit mAbPhospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244)  磷酸化S6核糖體蛋白抗體

硫酸鏈霉素滅菌溶液，30 mg/mlxa (D8L7U) Rabbit mAbPhospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235+Ser236)  磷酸化S6核糖體蛋白抗體

乙酰胺XPC (D1M5Y) Rabbit mAbphospho-RUNX3(Ser338)  磷酸化Runx3抗體

1,3-雙(三羥甲基)甲基氨基烷IFIT1 (D2X9Z) Rabbit mAbphospho-RUNX2(Ser451)  磷酸化成骨特異性轉錄因子抗體

萘乙酰胺(AR)Phospho-SLP-76 (Tyr145) Antibodyphospho-RUNX1(Ser266)  磷酸化急性髓細胞白血病1蛋白抗體

氫氧化鋇八CEACAM1 (D1P4T) Rabbit mAbphosphor-SMAD2(Ser425)  磷酸化細胞信號轉導分子SMAD2抗體
都柏林沙門(mén)氏菌PCR檢測試劑盒規格鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

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