注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
B9撲草凈標準溶液 100μg/ml,u=4%乙酸葉酯 98%

Ethephon撲草凈 分析標準品，99.5%乙酸葉酯 ≥98%, FCC, FG

IUPAC聚乙二二烯酸酯 平均分子量 ~258 反式-2-己烯 97%

IAA-Na聚乙二二烯酸酯 平均分子量~575正己 98%

IPA聚乙二二烯酸酯 平均分子量 ~700 正庚 97%

IPA-K聚乙二甲基烯酸酯 平均分子量 ~300正庚 standard for GC, ≥98% (GC)

IUPAC聚乙二甲基烯酸酯 平均分子量 ~475反-2-己烯酸  99%

IBA-K聚乙二甲基烯酸酯 平均分子量~950己酸葉酯 98%

NAAMw 400,000-500,000 ,20 wt. %溶液，800-1000 cP (25 °C) 反式-2-己烯 98%

NAA-K鹽酸巴馬汀 97% 反式-2-己烯 ≥98%, FCC, FG

β-Naphthaleneacetic acidN-苯基-1-萘胺 98%反-3-己烯-1- 97%

Triacontal異硫酸苯酯 99%, 蛋白測序級惕各酸葉酯 97%

Maleic Hydrazide酸 分析標準品惕各酸葉酯 97%，Kosher

Maleic hydrazide potassium salt聚乙烯硫酸鹽 平均分子量 Mw ~170,0002-辛基環(huán)戊酮  98%

Diphenylcartazide5-磷酰核糖-1-焦磷酸鈉鹽 80%2-己基環(huán)戊酮 98%

Betaine HC1氯菊酯 分析標準品苯甲酸葉酯 97%

非諾貝特PhosphoPlus® EGFR (Tyr1068) Antibody DuetSCN1B  鈉離子通道β1抗體

非諾貝特（標準品）PSMA2 (D3A4) Rabbit mAbSCN1A  SCN1A抗體

磺舒Phospho-Bad (Ser112) (40A9) Rabbit mAb (PE Conjugate)SCN11A/NAV1.9  鈉通道蛋白11α抗體

磺舒（標準品）NBC1/SLC4A4 AntibodySCN10A/NAV1.8  鈉通道蛋白10α抗體

諾氟沙星Phospho-GIT2 (Tyr392) (D8N9A) Rabbit mAbSclerostin  骨形態(tài)發(fā)生抑制蛋白SOST抗體

諾氟沙星（標準品）Upf2 (D3B10) Rabbit mAbSCHIP1/IQCJ  IQCJ抗體

諾氟沙星鹽酸鹽UBE2S (D5H9H) Rabbit mAbSCHAD/HADHSC(mouse, rat)  短鏈L-3羥烷基輔酶A脫氫酶抗體（小鼠，大鼠）

諾氟沙星鹽酸鹽（標準品）SignalSilence® MDR1/ABCB1 siRNA ISCHAD/HADHSC  短鏈L-3羥烷基輔酶A脫氫酶抗體

吲哚美辛Phospho-HS1 (Tyr397) (D12C1) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)SCGB3A1  結合珠蛋白家族3A1抗體

吲哚美辛（標準品）Cdc45 (D7G6) Rabbit mAbSCG3/SgIII  分泌粒蛋白3抗體
同病毒綿羊膿皰病毒PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家人金屬蛋白2(MT2)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：50克

人晶體蛋白α(Cryα)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人晶體蛋白β(Cryβ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人精氨酸加壓素(AVP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500毫升

人精氨酸酶(Arg)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT1克

人巨噬細胞刺激蛋白(MSP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃100毫克

人巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃100毫克

人巨噬細胞來(lái)源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5盒
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。