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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
2-Amithiazol-4-acetic acid對羥基聯(lián)苯 分析標準品,用于環(huán)境分析肉桂酸乙酯 99%

Citrinin棕櫚酸棕櫚酯 98%楊酸乙酯 99%

Gemcitabine棕櫚酸棕櫚酯 95%楊酸乙酯 ≥99%, FCC

dFdCyd藍五號鈉鹽 80%菠蘿酸乙酯 99%

Balofloxacin聚（甲基乙烯基共聚馬來(lái)酸） Mw ~216,000 to ~80,000, powder菠蘿酸乙酯 ≥99%, FCC, Kosher

LVFX四苯 99%乙基香蘭素 98%

Clarithromycin軟脂酸 分析標準品，>99%(GC)母菊酯 98%

Gibberellin A3苯基三氯化錫 分析標準品丁香酚 99%

Gibberllin A4+7苯基三氯化錫 98%桉葉油 99%

Zeatin二甲基二烯基氯化銨/烯酰胺共聚物 10 wt. % in H2O桉葉油 萜GC標準品 ,>99.5% (GC)

Trans-Zeatin對位紅 分析標準品,用于食品分析桉葉油 ≥99%, FCC

ABA巖芹酸 分析標準品,>99%(GC)4-乙基愈創(chuàng )木酚 99%

Adenine原卟啉 95%4-乙基愈創(chuàng )木酚 ≥98%, FCC, FG

Adenine hydrochloride聚烯酸 平均分子量M.W ~1,800 乙基麥芽酚 99%

VB4聚烯酸 平均分子量M.W ~450,000乙基麥芽酚 99%, FCC, FG

Chlormequat chloride液體石蠟 色譜固定液，80℃乙酰酸乙酯 99%

環(huán)吡司胺; 環(huán)吡酮胺（標準品）Phospho-HER3/ErbB3 (Tyr1289) Blocking PeptideSDH/Sorbitol Dehydrogenase  山梨脫氫酶抗體

頭孢西丁鈉ATF-4 (D4B8) Rabbit mAbSDH/S6PDH  6-磷酸山梨脫氫酶抗體

頭孢西丁鈉（標準品）DEPTOR/DEPDC6 (D9F5) Rabbit mAbSDF4  基質(zhì)細胞衍生因子4抗體（鈣結合蛋白）

頭孢西丁酸（頭孢西?。?/font>Phospho-GRB10 (Ser476) (D4E6) Rabbit mAbSDF-1/CXCL12  基質(zhì)細胞衍生因子－1抗體

頭孢西丁酸（頭孢西?。藴势罚?/font>Phospho-Acetyl-CoA Carboxylase (Ser79) (D7D11) Rabbit mAbSDF-1/CXCL12  基質(zhì)細胞衍生因子1抗體

纈沙坦Phospho-Acetyl-CoA Carboxylase (Ser79) (D7D11) Rabbit mAbSDCG1  血清學(xué)定義結腸癌抗原1抗體

纈沙坦（標準品）TCF12/HEB (D2C10) Rabbit mAbSDCCAG8  結腸癌抗原8抗體

格列吡 FKBP4 AntibodySDCCAG10  結腸癌抗原10抗體

格列吡 （標準品）Arrestin 1/S-Arrestin AntibodySCYLV  甘蔗SCYLV抗體

鹽酸多奈哌齊I型SSTR1 AntibodySCYL1BP1  SCYL結合蛋白1抗體
綿羊星狀病毒通用PCR檢測試劑盒規格人角化細胞內分泌因子(KAF)/雙調蛋白(AR)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人角化細胞生長(cháng)因子(KGF)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25克

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