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野牛奧斯特線(xiàn)蟲(chóng)PCR檢測試劑盒規格上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:PDXK檢測試劑盒已在瑞士、新加坡、泰國、韓國、比利時(shí)、西班牙等十三個(gè)國家設立代理商
產(chǎn)品分類(lèi)
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 野牛奧斯特線(xiàn)蟲(chóng)PCR檢測試劑盒規格 |
英文名稱(chēng) | Ostertagia bisonisPCR |
貨號 | LZP7088 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
Ub2-亞氨基生物素 98%正戊酰氯 98%
α-Lactalbumin肌苷-5′-磷酸二鈉鹽 99%酸 AR,50 % in H2O
Rifampicin5--2-胺 98%DL-3-氨基丁酸 97%
Erythromycin胰島素 ≥27 USP units/mg (HPLC)(S)-3-氨基-1,2- 98%
Bacitracin zinc烯酸異癸酯 98%,含70-100ppm對苯二酚穩定劑N-乙酰-D-纈氨酸 97%
Bacitracin2-丁酮酸 97%5-氨基戊酸 97%
Cytochalasin B亞油酸 99%N-乙酰-L-異亮氨酸 98%
CTX1,2,3,4,5,6-六氯環(huán)己烷 分析標準品DL-2-氨基丁酸 99%
Cephalexin mohydrate1,2,3,4,5,6-六氯環(huán)己烷 97%DL-α-氨基異丁酸 98%
Cephalosporin C zinc saltDL-乳酸鋰 97%BOC-L-纈氨酸 99%
CTC溶菌酶,雞蛋白 40000U/mgBOC-D-絲氨酸 98%
Ciprofloxacin hydrochloride亞麻酸 分析標準品 ,≥99% (GC)1-芐基哌 97%
Ciprofloxacin雙(*基硅烷基)氨基鋰 95%BOC-D-纈氨酸 98%
Actidione石膽酸 98%巴豆酸 98%
Netropsin dihydrochloride楊酸鋰 98%Fmoc-beta-氨酸 99%
Actimycin D楊酸鋰 99.99% N-羥基硫代琥珀酰亞胺 98%
硫酸長(cháng)春新堿/硫酸基長(cháng)春堿Phospho-Histone H3 (Ser10) Blocking PeptideSHARPIN 線(xiàn)性泛素鏈相關(guān)蛋白SHARPIN抗體
硫酸長(cháng)春新堿/硫酸基長(cháng)春堿(標準品)Micrococcal NucleaseSHARP1/DEC2 轉錄調節因子DEC2抗體
帕唑帕尼β-Catenin Blocking PeptideSHANK2 富含脯氨酸突觸相關(guān)蛋白SHANK2抗體
非洛地平/非氯地平CD81 (D5O2Q) Rabbit mAb (Mouse Specific)SHANK 1 富含脯氨酸突觸相關(guān)蛋白SHANK1抗體
非洛地平(標準品)HP1α Blocking PeptideShadow/shadow of prion protein(CT) 新朊蛋白抗體(C端)
6-硫鳥(niǎo)嘌呤(進(jìn)分)Neurofilament-L Blocking PeptideShadow/shadow of prion protein 新朊蛋白抗體
6-硫鳥(niǎo)嘌呤TCF1/TCF7 Blocking PeptideSH3TC2 脫髓鞘相關(guān)蛋白SH3TC2N抗體
6-硫鳥(niǎo)嘌呤(標準品)CTGF (E2W5M) Rabbit mAbSH3MD2/RNF142 環(huán)指蛋白142抗體
維A酸;全反式維A酸;維生素A酸;視黃酸Acetyl- and Phospho-Histone H3 (Lys9/Ser10) Blocking PeptideSH2D2A 血管內皮生長(cháng)因子受體相關(guān)蛋白抗體
維A酸;(標準品)Cleaved Caspase-8 (Asp391) Blocking PeptideSH2D1A/SAP 信號傳導T淋巴細胞活化相關(guān)蛋白抗體
野牛奧斯特線(xiàn)蟲(chóng)PCR檢測試劑盒規格人基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃100毫克
人基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
人基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃2毫克
人基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細胞膠原酶(MMP-8)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:500u
人基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/GelatinaseB)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃25毫升
人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1克
人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1公斤
人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1公斤
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。