注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
?
實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
MDH3,3'-二甲基聯(lián)萘胺 97%2-氯-1,3-二甲基氯化咪唑鎓 90%

Myokinase2.4-二酚 分析標準品（）氯代二哌啶碳鎓六氟磷酸鹽 98%

NeuraminidaseO,O-二乙基硫代磷酸鹽 98%氯代三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽 98%

Polyphel oxidase1-(3-二甲氨基基)-3-乙基碳二亞胺 97%多肽試劑TCTU 98%

PK2′-脫氧胞苷-5′-磷酸二鈉鹽 98%2-氯-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸鹽 98%

Tyrosine decarboxylase2′-脫氧腺苷-5′-單磷酸 98%3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三-4-酮 98%

UAO2,2-二苯基乙 99%代磷酸二乙酯 純度 ≥90%

Urokinase3,5-二氟芐胺 97%2-(2-吡啶酮-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟酸鹽  99%

Fibrilysin4,4'-二氨基二苯甲酮 98%N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺 99.0%

Chitinase3-羥基-D-酪氨酸 98%N,N'-琥珀酰亞胺基碳酸酯 98%

HSD1,4-二氫-2-甲酸 95%4-二甲氨基吡啶 99%

Sarcosine Oxidase6,8-二羥基芘-1,3-二磺酸二鈉鹽 97%4,4'-二甲氧基三苯基氯 98%

Creatininase amidohydrolase2,2'-二喹啉-4,4'-二羧酸 90%4,5-二基咪唑 98%

CRH二氯三(1,10-鄰二氮雜菲)釕(Ⅱ)，合 98%4,5-二基咪唑 99%

SAHH2,6-二氯-3-(三氟甲基)吡啶 98%二吡咯烷基(N-琥珀酰亞氨氧基)碳六氟磷酸鹽  98%

Purine-nucleoside phosphorylase1,3-二氯四甲基二硅氧烷 97%4-(4,6-二甲氧基三)-4-甲基嗎啉鹽酸鹽 97%

妥布霉素PIBF(progesterone induced blocking factor)  孕激素誘導阻斷因子(抗原)SLC7A9  離子轉運相關(guān)蛋白SLC7A9抗體

妥布霉素(標準品)PIWIL1(piwi-like 1)  piwi 樣1蛋白(抗原)SLC6A19  依賴(lài)鈉鈣交換蛋白6

硫酸妥布霉素PPAR Gamma (peroxisome proliferator-activated receptor-gamma)  過(guò)氧化酶活化增生受體γ（抗原）SLC5A8  鈉轉運體蛋白8抗體

硫酸妥布霉素(標準品)PP2Ac  蛋白磷酸酶4(抗原)Slc4a7/Nbcn1  碳酸氫鈉協(xié)同轉運蛋白4-A7抗體

托萘酯Runx3  一種新發(fā)現的抑癌基因(抗原)SLC4A4  碳酸氫鈉協(xié)同轉運蛋白4-A4抗體

拓撲替康鹽酸鹽RRAD (Ras-related associated with diabetes )  RRAD(多肽抗原)SLC44A1/CD92  溶質(zhì)轉運蛋白家族44成員1抗體

拓撲替康鹽酸鹽（標準品）SDF-1/CXCL12 (stromal cell derived factor-1)  基質(zhì)細胞衍生因子-1(抗原)SLC40A1/FPN1  細胞膜鐵轉運蛋白FP1抗體

托拉塞米shank1(SH3 and multiple anleyrin repead domins protein 1)  shank1多肽抗原SLC40A1  細胞膜鐵轉運蛋白FP1抗體

曲沃前列素slc22A17 (solute carrier famili 22)  溶質(zhì)轉運蛋白家族22成員17(多肽抗原)SLC39A7  轉運蛋白家族39成員7抗體

鹽酸曲唑酮SLC24A5 (solute carrier family 24, member 5)  可溶性載質(zhì)轉運蛋白SLC24A5（抗原）SLC39A6  SLC39A6抗體
奧利華斯病毒PCR檢測試劑盒規格人骨涎蛋白(BSP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人骨形成蛋白(BMPs)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT200張/盒

人骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人骨粘連蛋白(ON)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT，避光100克

人冠狀病毒(CoronavirusesIgG)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

人胱天蛋白酶12(Casp-12)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100U

人胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：250U

人胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：250毫克
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。