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尼帕病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:IRAK檢測試劑盒研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件
產(chǎn)品分類(lèi)
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時(shí)間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動(dòng)力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 尼帕病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū) |
英文名稱(chēng) | Nipah Virus(NiV)RTPCR |
貨號 | LZP7063 |
實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
L-Phenylalanil小鼠腸平滑肌細胞*培養基2,5-二甲基-2,5-雙(過(guò)氧化叔丁基)-3-己炔 試劑級
D-Phenylalanil小鼠腸粘膜上皮細胞*培養基乙酸異戊酯 AR,99%
D-Phenylglycil小鼠腸動(dòng)脈內皮細胞*培養基過(guò)氧化十二酰 98%
D-Prolil小鼠腸靜脈內皮細胞*培養基過(guò)硫酸鈉 99.99% metals basis
L-Methionionl小鼠肝實(shí)質(zhì)細胞*培養基四苯鈉 AR,99%
L-Threonil小鼠肝動(dòng)脈內皮細胞*培養基四苯鈉 99.5%
L-Valil小鼠肝動(dòng)脈平滑肌細胞*培養基2,5-二甲基-2,5-雙-(叔丁基過(guò)氧)己烷 93%
L-Isoleucil小鼠小腸血管內皮細胞*培養基正丁 GR()
D-Tryptophal小鼠小腸隱窩上皮細胞*培養基異丁 99%()
(R)-(−)-Leucil小鼠肝內膽管上皮細胞*培養基異丁 Standard for GC, ≥99.5% (GC)
Boc-L-asparagine小鼠胃粘膜上皮細胞*培養基聚烯酰胺 非離子型,分子量:200萬(wàn)-1400萬(wàn)
Boc-D-asparagine小鼠肝竇內皮細胞*培養基磷酸三苯酯 分析標準品,≥99.8%(GC)
Boc-Asp-OH小鼠肝星形細胞*培養基磷酸三苯酯 CP
Boc-D-Asp-OH小鼠直腸平滑肌細胞*培養基磷酸三苯酯 98%
Boc-L-glutamine小鼠小腸平滑肌細胞*培養基磷酸*酚酯 99%
Boc-D-glutamine小鼠結腸平滑肌細胞*培養基環(huán)胞霉素A 98%
氯替潑諾VEGFR-3(Vascular Epidemal growth factor receptor-3) 血管內皮細胞生長(cháng)因子受體-3抗原STAT4 信號轉導和轉錄激活因子4抗體
氯替潑諾(標準品)VWF (Von Willebrand Factor) 血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗原STAT3 信號轉導和轉錄激活因子3抗體
洛伐他汀Wnt1 信號通路Wnt1抗原STAT2 信號轉導和轉錄激活因子2抗體
洛伐他汀(標準品)WWOX (WW domain-containing oxidoreductase) 包含氧化還原酶的WW域抗原STAT1 信號轉導與轉錄激活因子1抗體
盧比前列腺素/盧比前列酮XIAP(X-linked Inhibitor of Apoptosis Protein) X-連鎖凋亡蛋白/性連鎖凋亡抑制蛋白抗原STARD8 GTP酶激活因子STARD8抗體
賴(lài)氨酸加壓素;賴(lài)氨加壓素XAF1(XIAP-associated factor 1) XIAP相關(guān)因子1凋亡抑制蛋白抗原STARD5 促黃體激素誘導蛋白5抗體
醋酸M肽XRCC1(X-ray Repair Cross Complementing 1) X射線(xiàn)修復交叉互補蛋白/細胞堿基切除修復基因抗原StAR/StARD1 促黃體激素誘導蛋白抗體
鹽酸甲氯芬酯ZO-1 peptide 胞質(zhì)緊密粘連蛋白1抗原Staphyloccocus aureus Rosenbach tropina 金黃色葡萄球菌菌體蛋白抗體
鹽酸甲氯芬酯(標準品)Ag-ARC(ARG3.1/ARC, Activity-regulated cytoskeleton-associated protein) ARC(多肽抗原)Stanniocalcin 1 斯鈣素抗體
安宮Angiotensin II receptor(Ang II ) 血管緊張素Ⅱ受體(抗原)STAM 信號轉導銜接蛋白1抗體
尼帕病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)人抵抗素(Resistin)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:保存:-20℃100毫克
人第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃1克
人電子轉移黃素蛋白β肽(ETFB)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:10克
人淀粉樣前體蛋白(βAPP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃1克
人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃1克
人凋亡相關(guān)半胱氨酸肽酶4(Casp4)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:5毫克
人凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃5克
人凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:5克