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擬枝孢鐮刀菌PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:CNX檢測試劑盒 低氧誘導因子1α(HIF-1α)轉鐵蛋白受體(TFR/CD71)
產(chǎn)品分類(lèi)
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 擬枝孢鐮刀菌PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家 |
英文名稱(chēng) | Fusarium sporotricoidesPCR |
貨號 | LZP6774 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
小鼠骨骼肌細胞*培養基價(jià)格Anti-LRP11 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 信號轉導 細胞分化 細胞外基質(zhì)
L-15(含雙抗)說(shuō)明書(shū)Anti-LRRC41 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 細胞周期蛋白 細胞骨架 細胞外基質(zhì)
DMEM低糖 (含HEPES、雙抗)說(shuō)明書(shū)Anti-LRRC41 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 細胞周期蛋白 細胞分化
β-桉葉醇51317-08-9價(jià)格Anti-LRRK1 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 細胞周期蛋白 細胞分化 表觀(guān)遺傳學(xué)
貝母素甲23496-41-5實(shí)驗步驟Anti-LTB Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 免疫學(xué)
莪術(shù)烯17910-09-7 實(shí)驗步驟Anti-LTB Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 發(fā)育生物學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)
甘草酸銨53956-04-0 *Anti-LTBR Antibody研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導 通道蛋白 細胞膜蛋白
紅景天甙10338-51-9 實(shí)驗方法Anti-LTO1 Antibody研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導
胡黃連苷II39012-20-9 實(shí)驗步驟Anti-LTK Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 通道蛋白 細胞膜蛋白
姜黃色素458-37-7實(shí)驗步驟Anti-LUC7L2 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 信號轉導 細胞骨架 細胞外基質(zhì)
三七皂甙Fe88105-29-7 *Anti-LW-1 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導 細胞膜受體 Alzheimer's
纖細薯蕷皂苷19083-00-2價(jià)格Anti-LTO1 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 染色質(zhì)和核信號 表觀(guān)遺傳學(xué)
異甘草苷5041-81-6*Anti-LY6E Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導 生長(cháng)因子和激素 激酶和磷酸酶 細胞膜受體 G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號
鳶尾黃素548-77-6*Anti-LY9 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 神經(jīng)生物學(xué)
知母皂苷B2 36656-07-0實(shí)驗步驟Anti-LYAR Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 信號轉導 細胞周期蛋白 轉錄調節因子 細胞分化 表觀(guān)遺傳學(xué)
2-甲硫基苯并噻唑
二丙烯胺
3--4'-甲氧基苯丙
4,5-二基-1-(2-)吡唑鹽
(S)-(+)-Methyl mandelate (S)-(+)-扁桃酸甲酯 21210-43-5
Methyl 3-(4-hydroxyphenyl)propionate 對羥基苯丙酸甲酯 5597-50-2
Ethyl 3-(N,N-dimethylami)acrylate 3-(二甲基)丙烯酸乙酯 924-99-2
Methyl glycolate 乙醇酸甲酯 96-35-5
大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體(AIL)ELISA試劑盒 ,英文名: AIL ELISA Kit
人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA檢測試劑盒humanβ2-microglobulin,BMG/β2-MGELISAKit 96T/48T
大鼠層連蛋白/板層素(LN)免疫試劑盒 Rat Laminin,LN ELISA kit
CLIAKitfoNF-Alpha(MouseTumornecrosisfactorAlpha)ELISAKIT小鼠腫瘤壞死因子α規格:48T/96T
全組織肌肉磷酸化酶(Myophosphorylase)活性染色試劑盒10次
ELISAKitai-parotidductAb人抗腮腺管抗體規格:48T/96T
擬枝孢鐮刀菌PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家Magnesium gluconate,≥98%通用試劑 100G
Gemcitabine hydrochloride,98%通用試劑 10MG
Sodium Cyclamate,99%通用試劑 100G
Orange G通用試劑 25G
Biological stain通用試劑 25G
Mucic acid,98%通用試劑 25G
n-Octyl-β-D-Thioglucopyraside,≥99%通用試劑 1G
D-(?)-Tagatose通用試劑 250MG
2-Fluoro-2-deoxy-D-glucose通用試劑 25MG
L-Gulose,98%通用試劑 100MG
Heparin lithium通用試劑 1G
Zein,≥92.0%通用試劑 100G
β-Lactoglobulin from bovine milk,≥90%通用試劑 50MG
Ciprofloxacin (HPLC,≥98.0%)通用試劑 5G
Micycline hydrochloride,98%通用試劑 100MG
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。