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腺病毒型PCR檢測試劑盒規格

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腺病毒型PCR檢測試劑盒規格
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更新時(shí)間:2021-03-14
訪(fǎng)問(wèn)次數:633

組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時(shí)間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動(dòng)力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。?

 產(chǎn)品名稱(chēng)

 腺病毒型PCR檢測試劑盒規格

 英文名稱(chēng)

 Adenovirus(AV)APCR

 貨號

 LZP6344

實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
人蛋白質(zhì)二硫鍵異構酶(PDI)elisa試劑盒Anti-APOC3 Antibody研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 細胞粘附分子 細胞膜蛋白

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人單純皰疹病毒Ⅰ+Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗體(IgM)elisa試劑盒Anti-ApoER2/LRP8 Antibody研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 干細胞 表觀(guān)遺傳學(xué)

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人吡哆醛/吡哆醇維生素B6磷酸酶(PDXP)elisa試劑盒Anti-APP Antibody(原貨號PB0101)研究領(lǐng)域 免疫學(xué) 細胞凋亡 激酶和磷酸酶 細胞表面分子

人白細胞免疫球蛋白樣受體亞家族B成員4(LILRB4)elisa試劑盒Anti-APP Antibody研究領(lǐng)域 藥物及化合物

人白三烯D4(LTD4)elisa試劑盒Anti-APPL1 Antibody研究領(lǐng)域 心血管 免疫學(xué) 信號轉導

人白介素增強子結合因子2(ILF2/NF45/PRO3063)elisa試劑盒Anti-APPL1 Antibody研究領(lǐng)域 心血管 信號轉導 內分泌病

人白介素7(IL-7)elisa試劑盒Anti-APRT Antibody研究領(lǐng)域 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

β2轉鐵蛋白(β2TF)elisa試劑盒Anti-AQP10 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細胞凋亡 細胞膜受體

α-黑色素細胞刺激素(α-MSH)elisa試劑盒Anti-APRT Antibody研究領(lǐng)域 心血管 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

α2-HS糖蛋白(AHSG)抗體elisa試劑盒Anti-AQP1 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 免疫學(xué)

BPLAgar

MZACAgar

哥倫比亞MUG培養基 Columbia- MUG Medium 250 大腸桿菌的熒光檢測(SN標準)

蛋白胨-鹽溶液250g/瓶樣品的稀釋(NY)incubationmedia蛋白胨-鹽溶液250g/瓶樣品的稀釋(NY)

營(yíng)養瓊脂平板(9cm) 10個(gè)/包 細菌計數、不含糖,可作血瓊脂基礎和傳代用

乙酸鉛培養基  Lead Acetate Medium  250克  細菌的硫化氫試驗

EF-18瓊脂  EF-18 Agar  250克  濾膜法檢測食品中沙門(mén)氏菌

LST肉湯  LST Broth  250克  各種食品中大腸菌群近似值(MPN)測定

大腸桿菌檢驗肉湯  E.Coli Broth  250克  糞大腸菌群、大腸桿菌的檢驗
腺病毒型PCR檢測試劑盒規格磷酸化組蛋白去乙?;?/font>4(Ser246)抗體Dehydroabietil中文名:別名:8,11,13-Abietatrien-18-ol; Dehydroabietan-18-ol分子式:C20H30O

磷酸化組蛋白去乙?;?/font>7抗體18-rabieta-8,11,13-trien-4-ol中文名:別名:分子式:C19H28O

磷酸化組蛋白去乙?;?/font>4抗體Effusanin A中文名:別名:分子式:C20H28O5

流感病毒H3N8血凝素抗體Picrasin B中文名:苦樹(shù)素B別名:Nigakilactone I; Simalikalactone B分子式:C21H28O6

流感病毒H3N7血凝素抗體Methyl 7α,15-dihydroxydehydroabietate中文名:別名:分子式:C21H30O4

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