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產(chǎn)品名稱(chēng)：食管癌細胞
英文簡(jiǎn)稱(chēng)：KYSE450 細胞

貨號：LZ-X969747
規格：T25
生長(cháng)特性：貼壁

凍存培養基：
凍存細胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養基。
1）細胞凍存培養基是一種用于哺乳動(dòng)物細胞的即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案：
以下實(shí)驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實(shí)驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 
1.配制凍存培養基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來(lái)。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動(dòng)細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細胞種類(lèi)。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應不時(shí)輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

實(shí)驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養皿1個(gè)，細胞培養瓶1個(gè) 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實(shí)驗報告：
一、分離與培養：
   1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí)，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

銀杏酚酸Linoleic acid；亞油酸冰凍切片半胱氨酸蛋白酶12（CASPASE-12）活性原位熒光染色檢測試劑盒

銀杏內酯AMethimazole；甲巰咪唑/甲硫噻唑冰凍切片半胱氨酸蛋白酶13（CASPASE-13）活性原位熒光染色檢測試劑盒

銀杏內酯BBifonazole；聯(lián)苯芐唑冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-2（CASPASE-2）活性原位熒光染色檢測試劑盒

銀杏內酯CQuercetin-3-O-b-D-glucose-7-O-b-D-gentiobiosiden；槲皮素-3-O-Β-D-葡萄糖-7-O-Β-D-龍膽雙糖苷冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-3（CASPASE-3）活性原位熒光染色檢測試劑盒

銀杏內酯JSesamin；芝麻素冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-4（CASPASE-4）活性原位熒光染色檢測試劑盒

銀杏雙黃酮Berbamine hydrochloride；鹽酸小檗冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-5（CASPASE-5）活性原位熒光染色檢測試劑盒

吲哚Sinomenine Hydrochloride；鹽酸青藤堿冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-6（CASPASE-6）活性原位熒光染色檢測試劑盒

隱丹參酮Phlorizin；根皮苷冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-7（CASPASE-7）活性原位熒光染色檢測試劑盒

隱綠原酸Phloretin；根皮素冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-8（CASPASE-8）活性原位熒光染色檢測試劑盒

櫻草素L-Xylose；L-木糖冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-9（CASPASE-9）活性原位熒光染色檢測試劑盒

鷹嘴豆芽素AAdenosine 3',5'-cyclophosphate/cAMP；環(huán)磷酸腺苷冰凍切片膽色素格美林（Gmelin）染色試劑盒

硬飛燕草堿Geraniin；老鸛草素冰凍切片膽色素霍爾（Hall）染色試劑盒

硬脂酸甲酯Creatinine；肌酐/肌酸酐冰凍切片膽色素普歇（Pouchet）染色試劑盒

油酸α-Naphthoflavone；α-萘黃酮冰凍切片膽色素史?。⊿tein）染色試劑盒

油酸甲酯Antipyrine；安替比林冰凍切片彈性纖維（ELASTIC）馬森（MASSON）染色試劑盒
KYSE450 細胞原癌因蛋白/活化蛋白1抗體卡維?。藴势罚?Moxonidine

死亡活化蛋白抗體克拉霉素（標準品） Moxonidine

角蛋白19抗體克拉維 Nepafenac

角蛋白2抗體克林霉素磷酯(標準品) Nepafenac

角蛋白4抗體克霉唑(標準品) Nicarbazin

色素b245輕鏈抗體喹乙;喹酰（標準品） Nimustine HCl(ACNU)

5號染色體開(kāi)放閱讀框44抗體醌式利福平（標準品） NVP-BEZ 235

心臟特異性絲氨蛋白酶抗體拉呋替?。藴势罚?/span> Pemirolast potassium

胞漿型磷脂酶A2抗體拉米夫定(標準品) Perindopril erbumine
注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無(wú)顯著(zhù)影響，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會(huì )嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過(guò)程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì )消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀(guān)察時(shí)，盡量縮短觀(guān)察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時(shí)，如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時(shí)出現了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細胞，并且通過(guò)調整相關(guān)設置和參數也無(wú)法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。