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產(chǎn)品中心

Product Center

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CTSC組織蛋白酶CELISA試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

CTSC組織蛋白酶CELISA試劑盒公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品:EPEC/E.coli /FITC 熒光標記兔抗腸致病性大腸桿菌抗體IgG?;?活力≥30000u/g
EphA1 R/FITC 熒光標記抗EphA1-R受體抗體IgG大豆油 試劑級
EphA2 R/FITC 熒光標記兔抗人、大、小鼠酪氨蛋白激受體A2抗體IgG大豆油 藥用級
Phospho-EphA2 (Tyr594) /FITC

更新時(shí)間:2022-05-26
訪(fǎng)問(wèn)次數:538

產(chǎn)品分類(lèi)

PRODUCT CLASSIFICATION

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標本要求:

1.標本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻進(jìn)行,提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱(chēng)

CTSC組織蛋白酶CELISA試劑盒

英文名稱(chēng)

CTSC ELISA Kit

產(chǎn)品規格

48T/96T

產(chǎn)品貨號

LZ-E028524

需要而未提供的試劑和器材:

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時(shí),用多通道移液器

6. 蒸餾水,容量瓶等。

備試劑與收集血樣:

1.  收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時(shí);更長(cháng)時(shí)間須冷凍( -20   ℃或 -70   ℃ )保存,避免反復凍融。

2.  標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復作對倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。

4.  洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)


QQ截圖20200429162339.jpg

檢測程序:

1.  加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板:同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實(shí)驗前準備:

ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

1)血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。

2)血漿:

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。

3)尿液:

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

4)細胞培養上清:

檢測分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。

5)培養細胞

檢測細胞內的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。

6)組織標本

切割標本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

操作步驟:

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?,用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.溫育:操作同3。

8.洗滌:操作同5。

9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白空調零,450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

血管內皮生長(cháng)因子(VEGF)試劑盒 慈溪麥冬皂苷A二乙二二乙 for HPLC, ≥99%亞麻 ~70% (GC) ,天然

血管內皮生長(cháng)因子(VEGF)試劑盒 雌酚重氮乙乙酯 91%,≤10% dichloromethane鈦四丁酯 ≥99.0% (GC)

血管內皮粘附分子1(VCAM-1/CD106)試劑盒 次大風(fēng)子素4-羥-環(huán)己烷乙酯 98%鈦異酯 98%

血管內皮粘附分子1(VCAM-1/CD106)試劑盒 次3-酰-2-乙酯 97%鈦四乙酯 33-35% TiO2

可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體(sTRAIL)試劑盒 次野鳶尾黃素扁豆 ≥98.0%硅藻土 CP

可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體(sTRAIL)試劑盒 甘草查爾扁豆 分析標準品3-巰 98%

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體4(TRAIL-R4)試劑盒芒柄花苷2-乙-1,3-己二 分析標準品3-巰 99%,用于生化分析

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體4(TRAIL-R4)試劑盒囊1,2-環(huán)氧十二烷 95%3-巰酯  98%

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體3(TRAIL-R3)試劑盒桐乙苯 99.8%,無(wú)水級2,4-二苯 99%

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體3(TRAIL-R3)試劑盒五加苷E鉻藍 Indicator2,3-二  98%

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體1(TRAIL-R1)試劑盒五加皂苷B反式-4-氧肉桂異辛酯 98%三異 90%

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體1(TRAIL-R1)試劑盒楤木皂苷A麥角考寧 95%苯 Standard for GC,≥99.9% (GC)

腫瘤壞死因子β(TNF-β)試劑盒粗壯女貞苷Nβ-硫丹 分析標準品苯  AR, ≥99.5%

腫瘤壞死因子β(TNF-β)試劑盒醋棉酚EPA 酚類(lèi)混合物 phenl Mix 80 9個(gè)品種2000ng/μl異溶液苯  CP, ≥99.0%

腫瘤壞死因子α(TNF-α)試劑盒 醋辛酯L-乙硫氨 99%苯  ACS, ≥99.0%

腫瘤壞死因子α(TNF-α)試劑盒 催吐蘿芙木定2-乙炔苯 98%中苯標樣 分析標準品
CTSC組織蛋白酶CELISA試劑盒產(chǎn)品背景:

細胞凋亡是細胞的基本特征之一,它在機體的胚胎發(fā)育、組織修復、內環(huán)境的穩定和一些疾病發(fā)生過(guò)程等方面起著(zhù)十分重要的作用。

在正常細胞中,磷脂酰絲氨suan(PS)只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內側,而在細胞凋亡早期,細胞膜中的磷脂酰絲氨suan(PS)由脂膜內側翻向外側。在體內,巨噬細胞可以識別翻轉到細胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細胞清除,因此凋亡過(guò)程中并不伴隨局部的炎癥反應,而在細胞壞死的過(guò)程中則常常伴隨著(zhù)炎癥反應。

AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴(lài)性磷脂結合蛋白,能與細胞凋亡過(guò)程中翻轉到膜外的PS 高親和力特異性結合。PS 外翻發(fā)生在細胞核破裂,DNA 片段化以及凋亡相關(guān)蛋白出現之前,這使得Annexin V 與PS的結合成為凋亡早期的一種重要檢測標志事件。

檢測原理:

在正常的活細胞中,磷脂酰絲氨suan(phosphotidylserine,PS)位于細胞膜的內側,但在早期凋亡的細胞中,PS 從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面,暴露在細胞外環(huán)境中。

Annexin-Ⅴ能與PS 高親和力結合??赏ㄟ^(guò)細胞外側暴露的磷脂酰絲氨suan與凋亡早期細胞的胞膜結合。用標記了PE的AnnexinⅤ作為熒光探針,利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。細胞壞死的過(guò)程中也會(huì )發(fā)生細胞膜損傷,壞死的細胞會(huì )結合Annexin V-PE。

Annexin V-PE 通常與細胞膜非滲透性核酸熒光染料聯(lián)合使用以檢測凋亡細胞。常用的染料是7-AAD。正常細胞和早期凋亡細胞的細胞膜是完整的,核酸染料7-AAD 不能透過(guò)完整的細胞膜,但在凋亡中晚期的細胞和壞死細胞,7-AAD 能夠透過(guò)細胞膜與細胞核結合呈現紅色。

7-AAD/Annexin V-PE試劑盒將AnnexinⅤ與7-AAD匹配使用,可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞以及死細胞區分開(kāi)來(lái)。壞死細胞可以同時(shí)與Annexin V-PE和7-AAD 結合顯色,而7-AAD 則被排除在活細胞(PE陰性)和早期凋亡細胞(PE陽(yáng)性)之外。在沒(méi)有巨噬細胞的情況下,凋亡的后階段會(huì )像細胞壞死一樣發(fā)生整個(gè)細胞的解體,從而使凋亡晚期的細胞也同時(shí)被PE和7-AAD 結合染色呈現雙陽(yáng)性。

儲存條件:染色液2-8℃避光保存;結合液2-8℃保存;長(cháng)期不用-20℃保存。

Annexin V-PE染色液避免反復凍融,凍融2次以上可能會(huì )失效。長(cháng)期保存分裝后-20℃保存。

有效期:一年。


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