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Caki-1細胞

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Caki-1細胞公司相關(guān)產(chǎn)品:
γ-谷氨酰環(huán)轉移酶抗體PDGF-BB/FITC 熒光素標記血小板源性生長(cháng)因子-BB抗體IgG
生長(cháng)分化因子8/肌肉抑制素抗體PDGF-R-A/FITC 熒光素標記血小板源性生長(cháng)因子受體-A抗體IgG

更新時(shí)間:2021-08-30
訪(fǎng)問(wèn)次數:603

產(chǎn)品分類(lèi)

PRODUCT CLASSIFICATION

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產(chǎn)品名稱(chēng):腎透明細胞癌;Caki-1
英文簡(jiǎn)稱(chēng):Caki-1細胞

貨號:LZ-X968537
規格:T25
生長(cháng)特性:貼壁生長(cháng)

圖片2.jpg 

凍存培養基:
凍存細胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養基。
1)細胞凍存培養基是一種用于哺乳動(dòng)物細胞的即用型*凍存培養基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2)凍存培養基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養基,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案:
以下實(shí)驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實(shí)驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 
1.配制凍存培養基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來(lái)。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動(dòng)細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度,計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細胞種類(lèi)。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應不時(shí)輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低  1°C?;蛘?,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

圖片2.jpg 

實(shí)驗材料: 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè);
3、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養皿1個(gè),細胞培養瓶1個(gè) 
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細胞計數板1塊; 
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把; 
8、酒精燈1臺;

實(shí)驗報告:
一、分離與培養:
   1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
   5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
   1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí),棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
   2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜;
   5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

4-氨-2-氟苯酚戈登氏菌(加詞待譯)拉丁屬名: Nocardioides  oleivorans

4-氨-2-氟苯酚食石油類(lèi)諾卡氏菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應用等非醫療目的,不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用

2-氨-4-氟苯酚桃中田殼小圓孢菌拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

2-氨-4-氟苯酚釀酒酵母拉丁屬名: Pseudomonas brenneri

2-氟-4-苯布氏假單胞菌用途: 食用

2-氟-4-苯毛柄金錢(qián)菌(金針菇)注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應用等非醫療目的,不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用

2,5-二硫酚草木樨中華根瘤菌拉丁屬名: Pichia  farinosa

2,5-二硫酚粉狀畢赤酵母注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應用等非醫療目的,不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用

2,5-二硫酚香菇拉丁屬名: Flavobacterium sinopsychrotolerans

2-苯酰乙中華耐冷黃桿菌拉丁屬名: Streptomyces  glaucovioatratus

2,5-二羥-1,4-二噻烷青紫黑鏈霉菌拉丁屬名: Bacillus subtilis

2,5-二羥-1,4-二噻烷枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Aspergillus versicolor

2,5-二羥-1,4-二噻烷雜色曲霉拉丁屬名: Rhizomucor miehei

2--3-溴噻吩米黑根毛霉拉丁屬名: Streptomyces  luojiashanesis

二單叔丁酯珞珈山鏈霉菌拉丁屬名: Tumebacillus algifaecis

二單叔丁酯藻渣膨脹芽孢桿菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應用等非醫療目的,不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
Caki-1細胞兔甘露糖受體(MR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 癸烷硫鈉香菇用途: 分類(lèi) 研究

兔免疫球蛋白A1 (IgA1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒癸烷硫鈉枯草芽胞桿菌拉丁屬名: Streptomyces chryseus

兔可溶性腺苷環(huán)化酶(sAC)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒烯月桂酯淺金鏈霉菌拉丁屬名: Aspergillus oryzae (Ahlburg) Cohn

兔芳硫酯酶A(ARSA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  烯月桂酯米曲霉注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應用等非醫療目的,不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用

兔血管生成素樣蛋白6(ANGPTL6)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  乙二四叉膦煙管菌拉丁屬名: Saccharomyces  diastaticus

兔骺蛋白聚糖(EPYC)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  乙二四叉膦糖化酵母拉丁屬名: Rhizopus arrhizus var. delemar

兔半乳凝集素3(GAL3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒乙二四叉膦少根根霉戴爾變種拉丁屬名: Candida vaccinii

兔脂肪酶H (LIPH)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Diacetato[(S)-(-)-2,2'-bis(diphenylphosphino)-5,5',6,6',7,7',8,8'-octahydro-1,1'-binaphthyl]ruthenium(II),Ru(OAc)2[(S)-H8-binap]越桔假絲酵母拉丁屬名: Bacillus sp.

α橫紋肌肌動(dòng)蛋白(α-SCA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒磷鐠(III)芽孢桿菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應用等非醫療目的,不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用

兔膽囊收縮素/腸促胰酶肽B受體(CCKBR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 磷鈥水合物葡萄座腔菌拉丁屬名: Xanthomonas oryzae pv.oryzae

B淋巴瘤因子2(Bcl-2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Fmoc-D-4-苯氨稻生黃單胞菌*注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應用等非醫療目的,不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用

S100鈣結合蛋白A13(S100A13 )酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Fmoc-3-(3-吡啶)-D-氨果生鏈核盤(pán)菌拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

兔視網(wǎng)膜母瘤抑制蛋白(PRB)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 1-癸硫釀酒酵母注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應用等非醫療目的,不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用

兔生長(cháng)激素誘導跨膜蛋白(GHITM)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒1-癸硫竹針孢座囊菌拉丁屬名: Penicillium restrictum

兔孕激素/孕(Pg)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒1-癸硫局限青霉拉丁屬名: Gracilibacillus xinjiangensis

兔胸腺依賴(lài)性抗原(TD-Ag)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒重氧水, 氧18水新疆纖細芽孢桿菌拉丁屬名: Amycolatopsis sp.
注意事項:
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無(wú)顯著(zhù)影響,但為取得良好的使用效果,3-6個(gè)月內推薦4℃保存,并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染,會(huì )嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測,時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過(guò)程中使用了胰酶,需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì )消化并降解Annexin V-FITC,導致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀(guān)察時(shí),盡量縮短觀(guān)察時(shí)間,同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時(shí),如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時(shí)出現了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細胞,并且通過(guò)調整相關(guān)設置和參數也無(wú)法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

 


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