產(chǎn)品名稱(chēng)：肝癌細胞；SNU-475
英文簡(jiǎn)稱(chēng)：SNU-475細胞

貨號：LZ-X968375
規格：T25
生長(cháng)特性：貼壁生長(cháng)

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凍存培養基：
凍存細胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養基。
1）細胞凍存培養基是一種用于哺乳動(dòng)物細胞的即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案：
以下實(shí)驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實(shí)驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 
1.配制凍存培養基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來(lái)。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動(dòng)細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細胞種類(lèi)。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應不時(shí)輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

實(shí)驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養皿1個(gè)，細胞培養瓶1個(gè) 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實(shí)驗報告：
一、分離與培養：
   1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí)，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無(wú)顯著(zhù)影響，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會(huì )嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過(guò)程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì )消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀(guān)察時(shí)，盡量縮短觀(guān)察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時(shí)，如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時(shí)出現了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細胞，并且通過(guò)調整相關(guān)設置和參數也無(wú)法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
綿羊上皮型鈣粘蛋白 (E-Cad)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 (R)-2-(氨)-1-BOC-吡咯烷巴斯德畢赤酵母拉丁屬名: Debaryomyces  hansenii

綿羊谷氨脫羧酶1(GAD1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(R)-2-(氨)-1-BOC-吡咯烷漢遜德巴利酵母拉丁屬名: Aspergillus  oryzae

綿羊促睡眠肽α(δSIP-α)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 D-阿洛糖米曲霉拉丁屬名: equisimilis

綿羊β淀粉樣前體蛋白(βAPP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒D-阿洛糖類(lèi)馬鏈球菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應用等非醫療目的，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

綿羊腦多巴神經(jīng)營(yíng)養因子(CDNF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 D-阿洛糖桃中田殼小圓孢菌拉丁屬名: Lactobacillus  paracasei

綿羊胰腺再生蛋白1α(REG1α)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒D-阿洛糖類(lèi)干酪乳桿菌拉丁屬名: Streptomyces antibioticus (Waksman et Woodruff) Waksman et Henrici

綿羊VIII型膠原α1(COL8α1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 α-D-(+)-塔羅糖抗生鏈霉菌用途: 分類(lèi)、研究，具有用作耐重金屬因資源潛力。

綿羊踝蛋白(TLN)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒α-D-(+)-塔羅糖熒光假單胞菌拉丁屬名: Pullularia pullulan

綿羊早期生長(cháng)應答蛋白3(EGR3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4-羥硫代苯酰出芽短梗霉注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應用等非醫療目的，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

綿羊抗磷脂酰絲氨抗體(APSA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  4-羥硫代苯酰香菇注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應用等非醫療目的，不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

綿羊肌球蛋白重鏈1(MYH1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 6-溴-5-氟-1H-吲哚三隔鐮刀菌拉丁屬名: Flavobacterium  sp.

綿羊核孔蛋白133kda(NUP133)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒6-溴-5-氟-1H-吲哚天格爾黃桿菌拉丁屬名: Cephaleuros virescens

綿羊磷肌-3-激酶(PI3K)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒乙二封端的聚乙烯亞柑橘藻斑病*拉丁屬名: Lysinibacillus fusiformis

綿羊乙酰輔酶A(A-CoA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 DL-木糖紡錘形賴(lài)氨芽孢桿菌拉丁屬名: Polaromonas vacuolata

綿羊抗角蛋白抗體(AKA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 八甘單空泡單胞菌拉丁屬名: Bacillus  licheniformis

綿羊雙上腺皮質(zhì)激素樣激酶1(DCLK1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2,3-二地衣芽孢桿菌拉丁屬名: Gluconacetobacter  saccharivorans
SNU-475細胞雞早期生長(cháng)應答蛋白1(EGR1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒ANti-FHIT/FITC  熒光素標記抗脆性組氨酸三聯(lián)體抗體IgG

雞凝血因子V(F5)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  Anti-Fibulin 1/FITC  熒光素標記抗“衰老關(guān)鍵蛋白"抗體IgG

雞磷脂酶C(PLC)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-Phospho-FHIT (Tyr114) /FITC  熒光素標記抗磷酸化脆性組氨酸三聯(lián)體抗體IgG

雞封閉蛋白11(CLDN11)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-Fibulin-5/FITC  熒光素標記抗“衰老關(guān)鍵蛋白"抗體IgG

雞靶向核糖核酸酶(TR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-FLG/FITC  熒光素標記絲聚蛋白/中間絲蛋白抗體IgG

雞核因子κB抑制蛋白α(IκBα)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-FLIP S/L /FITC  熒光素標記凋亡調節因之一抗體IgG

雞HtrA絲氨酸肽酶1(HTRA1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-FLIPS/FITC  熒光素標記凋亡調節因之一抗體（短型）IgG

雞平滑肌肌球蛋白(SMM)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-FN /FITC  熒光素標記纖維連結蛋白抗體IgG