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HLF細胞

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

HLF細胞公司相關(guān)產(chǎn)品:
G蛋白偶聯(lián)受體128抗體MMP-13 /FITC 熒光素標記質(zhì)金屬蛋白酶13抗體IgG
G蛋白偶聯(lián)受體146抗體MMP-14/FITC 熒光素標記質(zhì)金屬蛋白酶-14抗體IgG

更新時(shí)間:2021-08-30
訪(fǎng)問(wèn)次數:661

產(chǎn)品分類(lèi)

PRODUCT CLASSIFICATION

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產(chǎn)品名稱(chēng):肺成纖維樣細胞;HLF
英文簡(jiǎn)稱(chēng):HLF細胞

貨號:LZ-X968367
規格:T25
生長(cháng)特性:貼壁生長(cháng)

圖片2.jpg 

凍存培養基:
凍存細胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養基。
1)細胞凍存培養基是一種用于哺乳動(dòng)物細胞的即用型*凍存培養基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2)凍存培養基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養基,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案:
以下實(shí)驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實(shí)驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 
1.配制凍存培養基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來(lái)。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動(dòng)細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度,計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細胞種類(lèi)。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應不時(shí)輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低  1°C?;蛘?,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

圖片2.jpg 

實(shí)驗材料: 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè);
3、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養皿1個(gè),細胞培養瓶1個(gè) 
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細胞計數板1塊; 
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把; 
8、酒精燈1臺;

實(shí)驗報告:
一、分離與培養:
   1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
   5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
   1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí),棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
   2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜;
   5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

綿羊內皮素轉化酶1(ECE1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒代磷二苯酯擬青霉用途: 生產(chǎn)細菌肥料

綿羊生長(cháng)激素受體(GHR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4-(4-嗎啉代)苯巨大芽胞桿菌拉丁屬名: Mucor flavus

綿羊B淋巴瘤因子10(Bcl-10)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4-(4-嗎啉代)苯黃色毛霉拉丁屬名: Penicillium citrinum

綿羊成纖維生長(cháng)因子23(FGF23)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4-(4-嗎啉代)苯桔青霉注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應用等非醫療目的,不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用

綿羊生長(cháng)調節致癌因β(GROβ)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  2,2,4-三-1,3-戊二單異丁酯茶薪菇注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應用等非醫療目的,不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用

綿羊N-乙酰β-D-氨葡萄糖苷酶(NAGase)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2,2,4-三-1,3-戊二單異丁酯雞松茸注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應用等非醫療目的,不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用

綿羊中期因子(MK)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒庚酰產(chǎn)紫青霉拉丁屬名: Halomonas glaciei

綿羊β內啡肽受體(β-EPR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒庚?!氨}單胞菌"拉丁屬名: Bacillus  cereus

綿羊磷二酯酶4D(PDE4D)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(全氟己)乙烯蠟狀芽孢桿菌拉丁屬名: Panaeolus fimicola

綿羊鈣調素(CAM)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  (全氟己)乙烯糞生花褶傘拉丁屬名: Ganoderma tsugae Murrill

綿羊內皮蛋白C受體(EPCR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒CHIR-99021松杉靈芝注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應用等非醫療目的,不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用

綿羊彈性蛋白(ELN)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 三氟磺鐿水合物淡紫擬青霉拉丁屬名: Bacillus idriensis

綿羊VII型膠原(COL7)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 三氟磺鐿水合物病研所芽孢桿菌拉丁屬名: Flavobacterium psychrolimnae

綿羊氨端前心鈉肽(NT-ProANP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒三氟磺鐿水合物冷湖黃桿菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應用等非醫療目的,不可用于類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用

綿羊核受體相互作用蛋白1(NRIP1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒3-乙酰-2,5-二噻吩球孢白僵菌拉丁屬名: Saccharomyces Cerevisiae

綿羊膀胱癌抗原(UBC)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒3-乙酰-2,5-二噻吩釀酒酵母拉丁屬名: Syncephalastrum racemosum
HLF細胞雞粒集落激因子(CSF3/GCSF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-ET-1/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標記內皮素-1單克隆抗體IgG

雞腦鈉素/腦鈉肽(BNP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-ETK/BMX/FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠非受體性蛋白酪氨酸激酶ETK抗體IgG

雞泛素交叉反應蛋白 (UCRP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-Phospho-ETK (Tyr40) /FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化非受體性蛋白酪氨酸激酶ETK抗體IgG

雞糖皮質(zhì)激素受體α(GRα)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-E Tag/FITC  熒光素標記抗E Tag抗體IgG

雞補體因子8b(C8b)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  Anti-ets1/E26 /FITC  熒光素標記Ets轉錄因子家族ets1抗體IgG

雞多聚血清蛋白(PHSA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-Eukaryotic aspartyl protease/FITC  熒光素標記天冬氨酸蛋白酶家族蛋白抗體IgG

雞雄激素受體(AR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  Anti-EV71/FITC  熒光素標記腸道病71型/手足口病病抗體IgG

雞核因子κB受體激活因子配(RANκL)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-EV71(CT)/FITC  熒光素標記腸道病71型/手足口病病抗體(C端)IgG
注意事項:
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無(wú)顯著(zhù)影響,但為取得良好的使用效果,3-6個(gè)月內推薦4℃保存,并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染,會(huì )嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測,時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過(guò)程中使用了胰酶,需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì )消化并降解Annexin V-FITC,導致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀(guān)察時(shí),盡量縮短觀(guān)察時(shí)間,同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時(shí),如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時(shí)出現了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細胞,并且通過(guò)調整相關(guān)設置和參數也無(wú)法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

 


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