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產(chǎn)品名稱(chēng)：中國倉鼠卵巢細胞；CHO-K1
英文簡(jiǎn)稱(chēng)：CHO-K1細胞

貨號：LZ-X968321
規格：T25
生長(cháng)特性：貼壁生長(cháng)

凍存培養基：
凍存細胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養基。
1）細胞凍存培養基是一種用于哺乳動(dòng)物細胞的即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。
2）凍存培養基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案：
以下實(shí)驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實(shí)驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。
1.配制凍存培養基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來(lái)。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動(dòng)細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細胞種類(lèi)。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應不時(shí)輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

實(shí)驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)； 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養皿1個(gè)，細胞培養瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細胞計數板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；

實(shí)驗報告：
一、分離與培養：
   1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí)，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

UMNSAH/DF-1細胞    雞胚胎成纖維細胞；UMNSAH/DF-1    T25    成纖維母細胞樣    貼壁生長(cháng)    DMEM(高糖）+10%FBS（gibco）    1：2傳代

Duckembryo細胞    鴨子胚胎成纖維細胞；Duckembryo    T25    成纖維母細胞樣    貼壁生長(cháng)    FM培養基    1：2傳代

CNE2細胞    鼻咽癌細胞；CNE2    T25    上皮細胞樣    貼壁生長(cháng)    1983年由谷淑燕、孔繁裔等建系；源自人鼻咽低分化鱗癌組織；原代細胞胰蛋白酶消化，48小時(shí)開(kāi)始生長(cháng)，傳代20天。裸鼠體內移植100%成瘤。    RPMI1640+10%bovinecalfserum    1：2傳代

CNE細胞    鼻咽癌細胞；CNE    T25    上皮樣    貼壁生長(cháng)    此細胞株來(lái)源于一位58歲女性鼻咽癌患者。    RPMI1640+10%FBS    消化CQ-5分鐘。1:2。3天內可長(cháng)滿(mǎn)。

NCI-H716細胞    結直腸腺癌細胞；NCI-H716    T25    上皮細胞樣    懸浮生長(cháng)，聚團，少數貼壁    從一位經(jīng)5-氟尿嘧啶治療的患者腹水中得到的細胞建立了這個(gè)細胞株。 與其它結直腸癌細胞系不同，這株細胞有多巴脫羧酶，細胞質(zhì)中有核心致密的內分泌型顆粒。 這株細胞不表達TAG-72 或CA19-9抗原，也不生成癌胚抗原（CA-A）    RPMI1640+10%FBS    1:3～1:6傳代，每周換液2～3次

LS174T細胞    結直腸腺癌細胞；LS174T    T25    上皮樣    貼壁生長(cháng)    LS 174T是LS 180 (ATCC CL 187)結腸腺癌細胞株的胰蛋白酶化變種。 它比親本更易傳代，象LS 180一樣生成大量的癌胚抗原(CA-A)。 電鏡研究表明有豐富的微絲和細胞質(zhì)粘液素液泡。 直腸抗原3陽(yáng)性。 p53抗原表達陰性，但mRNA表達陽(yáng)性。 與ATCC CL-187來(lái)源于同一個(gè)腫瘤。LS 174T細胞角蛋白染色陽(yáng)性。 癌基因CS-myc, N-myc, H-ras, N-ras, Myb, 和 fos的表達呈陽(yáng)性。 癌基因k-ras和sis的表達未做檢測。
   DMEM(高糖）+10%FBS    1：2傳代

COLO320HSR細胞    結直腸腺癌細胞；COLO320HSR    T25    半貼壁生長(cháng)    該細胞1984年建系，源自一位33歲患有大腸腺癌男性經(jīng)5-fu治療后的腹水。    RPMI1640+10%FBS    1:2。3天內可長(cháng)滿(mǎn)。

COLO320DM細胞    結直腸腺癌細胞；COLO320DM    T25    圓形的并能折光的    半貼壁生長(cháng)    該細胞可產(chǎn)生5-羥色胺、去甲腎上腺素、腎上腺素、ACTH和甲狀旁腺素。角蛋白、波形蛋白弱陽(yáng)性    RPMI1640+10%FBS    1:2。3天內可長(cháng)滿(mǎn)。

DLD-1細胞    結直腸腺癌上皮細胞；DLD-1    T25    上皮細胞樣    貼壁生長(cháng)    DLD-1是1977-1979年間D.L.Dexter和同事分離的兩株結直腸腺癌細胞株中的一株。在A(yíng)TCC和其它地方進(jìn)行的DNAfingerprinting和染色體組型分析表明這株細胞與HCT-15(CCL-225)相似，說(shuō)明這兩者是來(lái)自同一個(gè)人的不同克隆。他們的遺傳起源可通過(guò)DNAfingerprinting證實(shí)，但染色體組型分析顯示它們缺乏染色體標記一致改變或數目上一致改變。細胞的CSAp陰性(CSAp-)。DLD-1細胞的p53抗原表達呈陽(yáng)性(p53抗原產(chǎn)生了一個(gè)CS->    RPMI1640+10%FBS    消化5分鐘。1:2。4-5天長(cháng)滿(mǎn)。

NCI-H508細胞    結腸直腸腺癌細胞；NCI-H508[H508]    T25    貼壁生長(cháng)    RPMI1640+10%FBS    1：2傳代

HCT/Taxo1細胞    結腸癌紫衫醇耐藥株    T25    上皮樣    貼壁生長(cháng)    RPMI-1640    1：2傳代

HCT-8/V細胞    結腸癌長(cháng)春新堿耐藥株    T25    上皮樣    貼壁生長(cháng)    RPMI-1640    1：2傳代

SW620細胞    結腸癌細胞；SW620    T25    上皮樣    貼壁生長(cháng)    SW620是從一個(gè)51歲男性白人組織中分離得到。由A.Leibovitz等從一個(gè)淋巴結建株。細胞系主要由無(wú)絨毛的小園球細胞和雙極細胞組成。它僅合成少量癌胚抗原（CA-A）且在裸鼠中有高度的致瘤性    DMEM(高糖）+10%FBS    1:3傳代，2-3天換液一次

SW480細胞    結腸癌細胞；SW480    T25    上皮樣    貼壁生長(cháng)    SW480源自一位51歲白人男性患者的原位直腸腺癌，而SW620源自同一病人一年后的淋巴結轉移灶。該細胞CSAp和直腸抗原3陰性；角蛋白陽(yáng)性；p53基因第273位密碼子的G→A突變引起Arg→His替代，309位密碼子的C→T突變導致Pro→Ser替代；細胞p53蛋白表達水平升高；癌基因CS-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表達呈陽(yáng)性；未檢測到癌基因N-myc的表達；不表達Matrilysin（一種與腫瘤侵襲相關(guān)的金屬蛋白酶）。    L15: Leibovitz Medium  10%FBS　 無(wú)二氧化碳培養    1:2傳代，CQ-E2天換液一次

LOVO細胞    結腸癌細胞;LOVO    T25    上皮樣    貼壁生長(cháng)    LoVo建自1971年，從診斷為結腸腺癌的56歲男性白人的一個(gè)轉移到左鎖骨上區的腫瘤結節建系。癌基因CS-myc,K-ras,H-ras,N-ras,Myb,sis和fos的表達呈陽(yáng)性。癌基因N-myc的表達未做檢測。它在裸鼠中能成瘤。與107細胞聯(lián)合皮下接種５只裸鼠21天后全部成瘤。表達腫瘤特異的核基質(zhì)蛋白蛋白CCS-3和CCS-4。    F12K+10%FBS    1:3傳代，2-3天換液一次

HT-29細胞    結腸癌細胞；HT-29    T25    上皮樣    貼壁生長(cháng)    該細胞是1964年由FoghJ用移植培養方法和含15%FBS的F12培養液從原發(fā)性腫瘤分離的。近來(lái)，已建株的培養細胞用含血清的McCoy's5a培養基培養。該細胞系在裸鼠中成瘤，也能在類(lèi)固醇處理的地鼠中成瘤。該細胞可合成IgA、CA-A、TGFβ結合蛋白和黏液素；表達尿激酶受體，但沒(méi)有檢測到血漿酶原活性；不表達CD4，但細胞表面表達半乳糖神經(jīng)酰胺（HIV的可能替代受體）。該細胞系癌基因CS-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb、sis、fos陽(yáng)性；p53基因過(guò)表達，并且在273位密碼子處發(fā)    DMEM（高糖）+10%FBS    1：2傳代

HCT-8細胞    結腸癌細胞；HCT-8    T25    上皮樣    貼壁生長(cháng)    該細胞角蛋白陽(yáng)性；表達CA-A、堿性磷酸酶；與HRT-18為同一細胞。     RPMI1640+10%FBS    1:3傳代，2-3天換液一次

HCT-15細胞    結腸癌細胞；HCT-15    T25    上皮樣    貼壁生長(cháng)    DNA fingerprinting證據表明，這株細胞和DLD-1(ATCC CCL-221,人結直腸腺癌)來(lái)源于同一個(gè)人；但同工酶及細胞染色體組型分析仍存疑問(wèn)；細胞呈CSAp陰性(CSAp-)；角蛋白陽(yáng)性。     RPMI1640+10%FBS    1：2傳代

HCT-116細胞    結腸癌細胞；HCT-116    T25    上皮樣    貼壁生長(cháng)    HCT116是1979年M.Brattain等從患結腸癌的男性病人中分離的三株惡性細胞之一。在半固體瓊脂糖培養基中形成克隆。HCT116在無(wú)胸腺的裸鼠有致瘤性，形成上皮樣的腫瘤    McCOY's5A+10%FBS    1:3傳代，CQ-4天換液一次

COLO205細胞    結腸癌細胞；COLO205    T25    懸浮    該細胞系是1957年由T.U.Sample等從患有結腸癌的70歲男性白人的腹水中分離的。該病人在取腹水樣品前已用5-氟尿嘧啶治療4~6周。角蛋白免疫過(guò)氧化物酶染色陽(yáng)性；產(chǎn)生CA-A、IL10。    RPMI1640+10%FBS    1：2傳代

Caco2細胞    結腸癌細胞；Caco2    T25    上皮樣    貼壁生長(cháng)    此細胞株分離自一個(gè)原發(fā)性結腸癌。當細胞長(cháng)滿(mǎn)時(shí)，表現出典型的腸細胞分化的特征。Caco-2細胞表達維生素A酸結合蛋白I和視黃醇結合蛋白II，角蛋白陽(yáng)性。    RPMI1640+10%FBS    1：2傳代

RKO細胞    結腸癌細胞（低分化）；RKO    T25    上皮樣    貼壁生長(cháng)    RKO是一個(gè)低分化的結腸癌細胞系。RKO細胞含有野生型P53，但缺乏人甲狀腺受體核受體(h-TRbeta1)。RKO細胞的P53蛋白的水平高于RKO-E6細胞。RKO細胞系是RKO-E6和RKO-AS45-1的親本細胞系。該細胞系在裸鼠中成瘤，且在軟瓊脂中形成集落。    DMEM(高糖）+10%FBS    消化CQ-5分鐘。1:2。3天內可長(cháng)滿(mǎn)。

HCT/FU細胞    結腸癌氟尿嘧啶耐藥株    T25    上皮樣    貼壁生長(cháng)    RPMI-1640    1：2傳代

核受體亞家族3C組成員1ELIS檢測A試劑盒    Nuclear Receptor Subfamily 3, Group C, Member 1

利什曼病ELIS檢測A試劑盒    leishmaniasis

類(lèi)風(fēng)濕因子IgM抗體ELIS檢測A試劑盒    rheumatoid factor IgM

類(lèi)風(fēng)濕因子IgA抗體ELIS檢測A試劑盒    rheumatoid factor IgA

類(lèi)風(fēng)濕因子IgG抗體ELIS檢測A試劑盒    rheumatoid factor IgG

布魯東氏酪氨酸激酶ELIS檢測A試劑盒    Bruton'S Tyrosine Kinase

肺炎衣原體IgG抗體ELIS檢測A試劑盒    Chlamydiapneumoniae IgG

肺炎衣原體IgM抗體ELIS檢測A試劑盒    Chlamydiapneumoniae IgM

抗髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白抗體ELIS檢測A試劑盒    myelin oligodendrocyte glycoprotein antibody

抗新蝶呤抗體ELIS檢測A試劑盒    Neopterin antibody

細粒棘球絳蟲(chóng)糞IgG抗體ELIS檢測A試劑盒    Echinococcus granulosus IgG

細粒棘球絳蟲(chóng)糞IGM抗體ELIS檢測A試劑盒    Echinococcus granulosus IGM

維生素D結合蛋白1ELIS檢測A試劑盒    Vitamin D-binding protein 1

誘導骨髓白血病細胞分化蛋白Mcl-1ELIS檢測A試劑盒    Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1

肌骨素ELIS檢測A試劑盒    Myostatin

3-甲氧基去甲腎上腺素ELIS檢測A試劑盒    3-normetanephrine

3-甲氧基腎上腺素ELIS檢測A試劑盒    3-metanephrine

血小板內皮細胞聚集受體 1ELIS檢測A試劑盒    Platelet endothelial aggregation receptor 1

冠蛋白1CELIS檢測A試劑盒    Coronin 1C

CHO-K1細胞硒磷酸合成酶1ELIS檢測A試劑盒    selenophosphate synthetase I

乙酰輔酶A羧化酶合成酶ELIS檢測A試劑盒    acetyl-CoA carboxylase synthetase

維甲酸ELIS檢測A試劑盒    Tretinoin

組蛋白去乙?；?ELIS檢測A試劑盒    Histone Deacetylase 2

組蛋白去乙?；?ELIS檢測A試劑盒    Histone Deacetylase 3    
注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無(wú)顯著(zhù)影響，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會(huì )嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過(guò)程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì )消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀(guān)察時(shí)，盡量縮短觀(guān)察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時(shí)，如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時(shí)出現了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細胞，并且通過(guò)調整相關(guān)設置和參數也無(wú)法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。