熒光-PCR法中的普通PCR和qPCR引物設計原則有哪些區別呢？

　　一、二者的相同之處

　　序列的查找是一致的；

　　序列選取應在基因的保守區段；

　　選取合適的擴增片段大小

　　避免引物自身或與引物之間形成4個(gè)或4個(gè)以上連續配對；

　　避免引物自身形成環(huán)狀發(fā)卡結構；

　　Tm值在55-65℃，GC含量在40%-60%；

　　引物之間的TM相差避免超過(guò)2℃；

　　引物的3’端避免出現3個(gè)或3個(gè)以上連續相同的堿基。

　　二、二者的不同之處

　　qPCR產(chǎn)物長(cháng)度PCR要求在300bp以?xún)?，一般先選80-150bp之間；多對目的基因同時(shí)擴增，文獻上查來(lái)的引物條件會(huì )不同，需要設計盡可能條件一致的引物；目的基因含量比較低時(shí)，需要設計靈敏度比較高的引物；相對電泳法，qPCR靈敏度比較高，對引物的要求更高，引物二聚體要少，熔解曲線(xiàn)要求單一產(chǎn)物；PCR的目的是進(jìn)行定量或者相對定量，對擴增的效率有要求，對引物的二級結構要求高。

　　普通PCR引物根據實(shí)驗的要求不同，長(cháng)度一般是從150bp到幾千bp不等；對二級結構要求沒(méi)有qPCR高；對擴增效率要求不高；可選用梯度PCR儀，選擇不同退火溫度，對引物退火溫度要求不需要一致。