大鼠ELISA試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗體包被于酶標板上，實(shí)驗時(shí)樣品或標準品中的抗原會(huì )與包被抗體結合，游離的成分被洗去。依次加入生物s化物的抗體和辣根過(guò)氧化物酶標記的親和素?？贵w與結合在包被抗體上的抗原結合、生物s與親和素特異性結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長(cháng)處測OD值，抗原濃度與OD450值之間呈正比，通過(guò)繪制標準曲線(xiàn)計算出樣品中指標的濃度。
大鼠ELISA試劑盒試驗時(shí)老是失敗的幾個(gè)因素分析：
一、低信號強度
如果ELISA讀數低于吸光度下限，且目標樣本濃度超出標準曲線(xiàn)范圍，則進(jìn)行分析的樣本濃度可能太低，或者儀器所能分析的樣本檢測最佳條件可能未被滿(mǎn)足。在這種情況下，樣本所產(chǎn)生的檢測信號應該需要被級聯(lián)放大。
解決方案：
1.增加抗體的孵育時(shí)間。如果在室溫下孵育您的抗體2小時(shí)后的實(shí)驗結果并不理想，那么可以嘗試在4℃孵育過(guò)夜。如此，可允許抗原抗體大程度上的結合，并能擴大ELISA中的反應信號。
2.增加二抗-酶結合物的濃度。ELISA中的E代表酶（通常是辣根過(guò)氧化物酶，HRP），它與底物（通常是TMB）反應后可產(chǎn)生鮮艷的藍色。因而，將HRP濃度提高50％或將其加倍，則會(huì )產(chǎn)生更強的顏色，易于檢測。
3.充分避光，以保護TMB基質(zhì)不受光照影響，并確保其能最大限度地發(fā)揮其性能?？紤]到TMB對光線(xiàn)非常敏感，因而在黑暗中進(jìn)行ELISA平板的顯色反應會(huì )產(chǎn)生更強的信號。
二、重復性不好
同一個(gè)樣本間的各個(gè)復孔的讀數有顯著(zhù)性差異。
解決方案：
1.加樣量多少不一，操作時(shí)間長(cháng)短不一。重復同一樣本時(shí)，加樣量與加樣時(shí)間理應相同，同時(shí)也應注意移液器的校準。加樣后可輕微晃動(dòng)酶標板使反應液充分混合。
2.樣本應保證一致、無(wú)污染，并應該由同一名操作人員進(jìn)行操作。
3.精密度測定方法不標準，此時(shí)理應采用正確的方法進(jìn)行操作。
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更新時(shí)間：2022-11-14
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