PCR擴增試劑盒提供DNA高保真擴增所需要的基本試劑。DNA擴增時(shí)，用戶(hù)需要自行準備模板和擴增所需要的引物。高溫嗜熱Pfu DNA聚合酶主要用于對保真度要求非常高的DNA擴增，這些擴增要求擴增的產(chǎn)物中不能出現突變等錯誤。Taq DNA聚合酶的擴增性能很強，但是用Taq擴增的PCR產(chǎn)物中有難以避免的隨機突變。Pfu DNA聚合酶除了5′-3′的聚合特性外，還有3′-5′端外切酶活性，具有校正DNA擴增過(guò)程中突變。Pfu DNA的長(cháng)片段擴增的能力不及Taq DNA聚合酶，用戶(hù)如果用于長(cháng)鏈PCR擴增，可選用Long Taq或者Taq Plus DNA聚合酶。
PCR擴增試劑盒的實(shí)驗事項說(shuō)明：
1.樣本上多重PCR平臺可以做的樣本包括血液、唾液、口腔拭子，在實(shí)驗中，對于DNA投入量要求不是很高，根據不同項目需求，DNA投入量的范圍在100 pg-100 ng之間。
2.進(jìn)行PCR反應前可將所有g(shù)DNA的濃度稀釋到同一濃度，并轉移到PCR八聯(lián)管中，一方面是便于排槍操作，另一方面是加入相同起始量的gDNA，這樣可降低最終文庫的濃度差異，便于混合文庫。
3.大多數情況下引物是一管，操作相當方便；當目標區域是外顯子或者是其他連續區域時(shí)，我們會(huì )把引物分裝為二管，分別命名Primer pool T1與Primer pool T2，這時(shí)需要第二輪PCR前把產(chǎn)物合并，再進(jìn)行下一步反應。
4.執行多重PCR反應時(shí)，特別是樣本量多的情況下，可以將T1設為一組，T2設為一組，便于制備反應試劑混合液和排槍操作；并把解凍好的試劑放置在冰盒上，在冰盒上進(jìn)行加樣操作。
5.實(shí)驗中可在PCR管壁上和管蓋上同時(shí)進(jìn)行反應編號標記，防止高溫或其他原因導致記號消失，避免后續產(chǎn)物混合操作失誤，造成樣本交叉污染。
6.第二輪PCR后，因為B試劑比較粘稠，在清洗純化的時(shí)候不能吸走所有試劑，可以剩余5-10μl，否則會(huì )把磁珠一起吸走，造成樣品的損失，導致產(chǎn)物回收率下降。
實(shí)驗完成后，正常文庫濃度處于5-30 ng/μl，而片段長(cháng)度一般在280-460 bp之間，且主峰前后無(wú)雜峰，就可以進(jìn)行測序了。
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更新時(shí)間：2021-07-08
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