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C57BL/6小鼠T細胞淋巴瘤細胞;RMA培養的具體無(wú)菌技術(shù)要點(diǎn)

更新時(shí)間:2021-06-23點(diǎn)擊次數:1590

C57BL/6小鼠T細胞淋巴瘤細胞;RMA培養的具體無(wú)菌技術(shù)要點(diǎn):

1. 實(shí)驗開(kāi)始前,無(wú)菌室和無(wú)菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘*滅菌,用70%ethanol擦拭無(wú)菌操作臺面,并且打開(kāi)無(wú)菌操作臺風(fēng)扇運行10分鐘之后,才可以進(jìn)行實(shí)驗操作。每次操作只能處理一株細胞株,即使培養基*相同也不可共用培養基,以避免細胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗完成后,請將實(shí)驗物品拿出工作臺,用70%ethanol再次擦拭無(wú)菌操作臺面。操作間隔應該讓無(wú)菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后,才能進(jìn)行下一個(gè)細胞株的操作。
2. 無(wú)菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞,必要物品(試管架、吸管、吸取器或吸管盒等)可以暫時(shí)放置,其它實(shí)驗用品使用完畢后應移出,有利于空氣流通。實(shí)驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無(wú)菌操作臺內。實(shí)驗操作過(guò)程應在臺面的中央無(wú)菌區域內完成,請勿在邊緣非無(wú)菌區域進(jìn)行操作。
3. 小心取用無(wú)菌實(shí)驗物品,避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處,也不要在打開(kāi)的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開(kāi)后,請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身,傾斜大約45°角取用,盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。
4. 工作人員應當首先注意自身安全,必須穿戴齊實(shí)驗衣和實(shí)驗手套后才能進(jìn)行實(shí)驗。對于病毒感染或是來(lái)自人類(lèi)的細胞株應當特別小心操作,并選擇適當等級的無(wú)菌操作臺進(jìn)行(至少是Class II)。操作過(guò)程中,應避免引起aerosol的產(chǎn)生,小心有毒性藥品,例如DMSO和TPA等,并避免針頭的傷害等等。
5. 定期檢測下列項目:
5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力
5.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤(pán)是否有污染(水盤(pán)的水需用無(wú)菌水,每周定時(shí)更換)。
5.3. 無(wú)菌操作臺內的airflow壓力,定期更換紫外線(xiàn)燈管和HEPA過(guò)濾膜,預濾網(wǎng)(300小時(shí)/預濾網(wǎng),3000小時(shí)/HEPA)。
6. 水槽內可添加消毒劑(Zephrin 1:750),需定期更換水槽中的水。

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TEL:021-61210612

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